琼脂:英文名称为agar,食用菌母种PDA培养基中的A指的就是琼脂,是用海产的麒麟菜、石花菜、江蓠等制成的植物胶,因主要来自海南,故称为“琼脂”。琼脂是食用菌母种培养基必须使用的一种物质,起到固定培养基斜面的作用,菌丝并不能够利用琼脂的营养。
进入6月后,经常有朋友问制作的PDA培养基,琼脂的添加量和以前一样,为什么现在不能完全凝固了?琼脂在PDA培养基中添加量是2%,就是1000ml培养基加入琼脂20克,我们分析一下有几种原因导致琼脂不能完全凝固。
1灭菌过度
灭菌效果由温度和时间两个参数决定,PDA试管培养基的灭菌温度是121℃,时间是20-30min,如果两个参数有一个超出,就很容易引起琼脂不凝固。
解决办法:PDA试管培养基灭菌时间121℃,30min即可。对于液体培养基的灭菌温度121℃是足够的,为了保证灭菌效果将灭菌温度提高到125℃的做法是错误的。
2琼脂添加量少
琼脂添加量小于2%,或者称量不准确导致琼脂不凝固。
解决办法:保证琼脂添加量2%,校正天平,保证称量准确。
3琼脂质量差
使用劣质,或者长期存放的琼脂可能会导致琼脂不凝固。
解决办法:使用优质琼脂,有条件的一定要使用琼脂粉,琼脂条是食品添加剂,琼脂粉是实验试剂,质量可靠。
4加水量不准
配置培养基时,加水过多会导致琼脂不凝固。
解决办法:加水准确,以及熬制后重新称量,称量要用量筒,或者校正过的烧杯。
5分装时琼脂沉淀
在分装时,如果琼脂没有完全溶解,就很容易出现沉淀的情况,这样先分装的琼脂浓度就低,出现不能完全凝固的情况。
解决办法:做到完全溶解,同时边搅拌,边分装,均匀一致。
6pH值过低
pH值低于4.5,培养基酸化,琼脂会不凝固。
解决办法:引起PDA培养基酸化的原因主要是水的ph,所以尽量使用桶装水,桶装水呈弱碱性,而且稳定。
7环境温度高
夏天,一些没有空调的工厂,制作好的PDA培养基因环境温度过高而导致不能完全凝固。
解决办法:在夏季可以将1000ml培养基的添加比例提高到22克,如果需要添加到30克才能够凝固,说明琼脂质量有问题了。有条件的可以安装空调。
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