生成夹心状的抗体一抗原一抗体复合物，糖类抗原CA 50CA 125就用的其中的第三种方法（一步法）血清中的未知抗原与固相抗体和标志抗体同时反应。然后去除游离的标志抗体，测固相抗体一抗原一标志抗体复合物的放射性计数。
由于医院收住着患有各种疾病的病人，医院是病人集中的场所。可直接或间接地污染医院环境。医院的空气、地面、用具、门、窗把手、水槽、水龙头、医疗器械等皆可被病原微生物污染，甚至成为医院内感染微生物的储菌所。
越来越多的医院已经认识到污染的环境外表在传达病原微生物上发挥了重要的作用。Goodman2008指出，近年来。病原体污染环境，通常发生在日常的医疗过程中。许多研究已经描述了通过接触污染的房间外表传达病原体。Eckstein2007指出，感染或定植医疗相关病原体的病人，往往这些生物从他皮肤上脱落，并播散在环境中。尽管与病人直接接触一般被认为 医护人员的手获得病菌并随后传达给其他病人的主要来源，然而最近有几项研究表明，受污染的环境外表也发挥着传达病原体的重要作用。
标志抗原与定量抗体结合的复合物就少，主要特点：标志的抗原。其原理：未知抗原Ag+标志抗原Ag+已知定量抗体Ab标志抗原与抗体复合物AgA b+未知抗原与抗体复合物AgAb+游离标志抗原Ag去除）未知抗原多。表示为负相关）
根据加样顺序与温育次数的区别，临床上甲胎蛋白（AFP癌胚抗原（CEA 8一微球蛋白（pzMG铁蛋白（Fer人绒毛膜促性腺激素p亚单位（HCG-13等的检测都是竞争性RIA 法原理。竞争性RIA 法。反应方式分三种：平衡法，将非标记抗原（被测物与标准品）抗体、标志抗原依次加入反应管，混匀后一次性温育至反应达到动态平衡，再加分离剂分离B复合物）与F游离物）如：AFP8一MGFer顺序加样法，先将非标记抗原（被测物与标准品）与抗体在反应管内作第一次温育，待反应达到动态平衡后。加入标志抗原，再作第二次温育后，分离B与F如：CEA 急诊检测法：为临床急需检测结果而提出的反应方式，不等RIA 反应达到动态平衡就终止反应；分离剂的选择有，PEG聚乙二醇）第二抗体等。
固相抗体先与未知抗原结合，从加样测定顺序上看。再与标志抗体结合（正向两步法）然后去除游离的标志抗体，测固相抗体一抗原一标志抗体复合物的放射性计数；未知抗原先与标志抗体结合，再与同相抗体结合（反向两步法）然后去除游离的标志抗体，测固相抗体一抗原一标志抗体复合物的放射性计数；未知抗原与固相抗体和标志抗体同时反应（一步法，又称同时加样法）然后去除游离的标志抗体，测固相抗体一抗原一标志抗体复合物的放射性计数。
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