通常是由于细胞因子分泌的蛋白质,他们必须先被困在细胞内通过使用蛋白转运抑制剂。最常用的两种蛋白质运输抑制剂:“莫能菌素A(BD GolgiStop)”(BD GolgiPlug)。莫能菌素通过互动与高尔基体跨膜娜+ + / H +运输,防止蛋白的分泌,而菌素A再分配顺/内侧的内质网高尔基复合体细胞产生的蛋白质。因此,最好选择不同运输蛋白抑制剂细胞因子和物种。见表1。
CD8 +细胞中的IFN-γ和IL-2产生刺激外周血单核细胞与金黄色葡萄球菌肠毒素B进行6小时的布雷菲德菌素A的存在刺激后,细胞被固定和透性,使用BD Cytofix / Cytoperm的的缓冲液系统。以下的荧光抗体:CD3 FITC,CD4 PERCP循环?5.5,CD8艳紫421,IFN-γ的PE,和IL-2的APC细胞染色。然后洗涤细胞。最后,使用BD FACSVerse的?流式细胞仪分析细胞。
屋宇署已简化具备完善的工具包,缓冲系统,以及丰富的面板的荧光抗体细胞因子和细胞表面标志物的检测。多种荧光染料偶联的表面标志物和细胞因子的抗体。这使得在染色面板设计的灵活性,支持高含量多色流式细胞仪分析,以获得最珍贵的细胞样本数据。
BD FastImmune?套件包含荧光抗体测试的鸡尾酒,适当的蛋白质运输抑制剂,兼容的缓冲区,作最佳的准备和详细的协议,染色,产生细胞因子的细胞从全血的检测。板载检测BD FACSVerse流式细胞仪系统进一步简化这个过程。BD Cytofix / Cytoperm的缓冲已被成千上万的出版物引用,产生细胞因子的细胞通过流式细胞仪分析。研究人员选择最适合自己的细胞因子的利息蛋白转运抑制剂使用BD Cytofix / Cytoperm的缓冲系统,固定,通透和细胞染色,流式细胞仪分析。
抗原特异性IFN-γ产生由巨细胞病毒(CMV)的pp65抗原刺激的CD4 + CD69 + T淋巴细胞双色流式细胞仪散点图表明IFN-γ的CD4和CD69的表达被未受刺激的T细胞(左图),SEB刺激(作为阳性对照,中心板),CMV pp65抗原刺激(右图)的样品从两个捐助者。人类全血刺激菌素A定影之前,透,染色使用BD FastImmune?3色CD4细胞内细胞因子检测试剂盒的存在。使用BD流式细胞仪FACSVerse和的BD FACSuite?软件研发试验获得的数据。