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测定化学对照品纯度的方法 对待测物质进行纯度检查所用的分析方法与该物质的用途相关。可将这些分析方法分为三大类: 需要与外部化学对照品进行比对的方法(比如色谱法或者分光光度法); 只依赖于物质固有动力学属性的方法(比如相溶度分析法和差示扫描量热法); 重要的是通过多个项目的检测,确定化学对照品候选物质满足其使用要求。
为确定候选物质是否满足使用要求,对其进行标化的方法可分为2类:第1类是确定对照品候选物质结构的鉴别方法,第2类方法用于确定化学对照品的纯度。如果不能确定对照品原料中的杂质及其含量,对于多数分析方法,都不能以百分纯度的形式来表示该化学对照品的绝对量值。所以,标称的纯度就是根据各种分析方法的数据,对该物质真实量值的一个估计值。
确认化学对照品结构的方法 如果一个拟定对照品的化学结构已经非常确定,可以通过与权威物质红外图谱的比较来确认候选物质的结构。当该物质具有多晶型现象时,应特 别注意对红外图谱的影响[8] 。核磁共振图谱、质谱或者X-射线衍射晶体学图谱等高度专属的技术可能也会用于相关图谱的比较。如果准备用1个物质.
替代已经建立的具有相同分子组成的化学对照品必须对其结构进行确认,确保2个样本的特性一致。 如果是出于上述目的,对于换批对照品,只要比较前后2批对照品的红外吸收图谱即可。但是,当没有相应的权威样本进行比较,缺乏该物质相关特性的权威数据时,就可能需要像新化合物的结构确证工作那样,采用多种分析技术手段对化合物的结构进行确定。所用的技术可能包括元素分析、晶体学研究、质谱、核磁共振谱、官能团分析、红外光谱和紫外光谱,根据需要可能还有其他的补充试验,以便对拟定的标准物质进行全面的质量研究。
自制对照品纯度测定方法:
(1)你需要用三种不同展开剂对其进行薄层鉴别,并且至少有一种条件下其斑点足够大到稍有拖尾,如果三次都只得到一个斑点,说明其基本为一纯物质.
(2)液相测定,同样需用三种不同流动相或检测波长,如果有可能应尽可能做到主峰为平头峰,扣除溶剂峰后,以归一法计算含量.
具体的一种三萜酸A对照品为例吧。
1、首先是TLC验证：
1.1 选择三种不同的展开系统。要求：展开剂的种类不同，而且三种展开剂展开样品的Rf值最好有较大的区别。我用的三个系统是二氯甲烷：丙酮：冰醋酸＝9:1:0.1，石油醚：丙酮：冰醋酸＝25:10:0.3, 正己烷：乙酸乙酯：冰醋酸＝10：10：0.2.硅胶应使用用GF254。
1.2 点样。要求：用于点样的溶液要用易挥发容积配制，尽量的浓，点样量尽量的多，要保持展开后不脱尾。（点样量要自己摸）
1.3 用以上三个系统分别展开。展开前要饱和。
1.4 观察纯度。在254nm 观察除主斑点外有无其他暗斑点，如有为不纯。在365nm观察有无荧光斑点，如有为不纯。使用通用显色剂：如浓硫酸。观察有无除主斑点外其他现色斑点，如有为不纯。如果TLC鉴定为纯品可进行下一项。
2、 HPLC检测。
1.1 最好使用DAD检测器，可以同时测定5个不同波长，测定波长最好覆盖整个紫外－可见光区，我选择的是210、254、330、360、400nm。我的样品为白色，所以波长只到400nm，如果样品有颜色波长可以更长。
1.2 HPLC 测定，我测了三次，都是用乙腈（A）：0.03％磷酸水（B)梯度洗脱。第一次：(A)5％-100%；0－60min，第二次：（A）15％－50％；0－40min，第三次：（A） 25％－40％；0－30min。
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