摇瓶培养液体菌种技术这种方法用的设备主要是摇床分为往复式及旋转式两种,投资需几千元。其技术要求较发酵罐要低一些,容易掌握,适合一般的制种单位和大型个体户。整个生产流程包括培养基配制分装→消毒→冷却→接种→摇床培养→一级液体种→二级液体种→接固体培养基。培养液配制好后,装入三角烧瓶中,装量为三角烧瓶容量的1/5,并加入0~15粒小玻璃珠,灭菌过后接入一块约2平方厘米的斜面菌种,再静置培养48小时,再置往复式摇床上振荡培养,振荡频率、振幅根据对象食用菌而定,一般为80~100次/分,6cm~10cm。如果用旋转式摇床,振荡频率为200~220转/分。摇床室温控制在24℃~25℃,培养时间因菌类不同而异,一般是在7天左右。同样培养过程中需要时刻监测菌种的质量。
菌种质量监测生产过程中发酵液的质量检测是必不可少的一项,菌液颜色和气味是否正常是检测发酵液质量的重要标准。正常情况下,菌液初期略显浑浊,随着发酵的进行逐渐变为清澈,菌液颜色越来越淡;若有污染发生,菌液始终处于混浊状态,菌球与菌液的界限不明显,且发酵液颜色有异常变化。培养初期,菌液有培养基的香味,随着培养时间的延长会越来越淡,后期呈菌丝的气味;若染菌或菌种质量不好,会有酸、臭、酒味或其他异常的气味。因而在菌种培养过程中,工作人员要经常闻一闻排气口排出的气味是否有异常。
发酵终点的判定这直接关系到生产的液体菌种的数量和质量,发酵时间过短不仅会造成资源浪费菌种发酵也未达到最佳状态,发酵时间过长,营养消耗过度,会使菌体活力下降,甚至菌丝发生自溶。可以通过菌球形态、密度及菌液颜色、气味等指标进行初步判断。食用菌进行分批培养时遵循微生物生长曲线规律,即有延滞期、对数生长期、稳定期、衰亡期,其中对数生长期的菌丝体生活力最旺盛,是放罐接种的最佳时期。实践表明,培养72h形成活力最盛的菌球,直径约0.3cm,菌球浓度约80%~85%[1]3.液体菌种固化技术液体菌种较固体菌种有诸多优点,为食用菌生产的规模化指明了方向,但是液体菌种储存时间短,不易保存的特性,这一特性提高了液体菌种的生产成本,制约了液体菌种的进一步的推广应用。近年来有研究者提出将液体菌种同固体基质进行混合,形成固化菌种从而提高液体菌种的保存时间。食用菌液体菌种固化技术,可有效解决液体菌种的上述缺点。在优选的蔗糖、豆饼粉液体培养基中摇瓶培养香菇856,将得到的菌丝球与优选的
主要成分是棉籽壳的固化载体基质按l:6的比例混合,制成固化菌种,室温保藏30d,与保藏0d的固化菌种相比,呼吸强度低,纤维素酶活力明显升高,萌发力强,菌丝生长快。[5]另外还有研究者对固化菌种的生产成本进行了估算,按照本试验中的菌种固化方法及模拟的生产规模,计算出的平菇固化菌种生产成本为0.755元/千克,每千克比平菇常规菌种的生产成本0.9元低0.145元,减低比例达19.2%,具有明显的经济效益
液体菌种生产技术新走向——还原型液体菌种,还原型液体菌种不同于通常的发酵液体菌种,它是将利用尖端生物工程技术生产的菌丝块进行粉碎、稀释后做成的菌种。有实验证实这种菌种200克的菌丝块可以接种5万瓶,生产2吨食用菌,众所周知食用菌生产过程中要使用大量菌种,生产环节中成本最高的就是菌种,还原型液体菌种技术能够使用极少量的菌种生产大量食用菌极大的降低了生产成本,无疑是技术上的革新,可能成为将来食用菌生产技术新的发展方向。还原型液体菌种还有诸多优点:比如说可以任意选择菌丝浓度、培养与生育时间缩短。以金针菇为例,利用固体木屑种生长周期为55天,利用发酵液体菌种为48天.而利用还原型液体菌种为42天。初期投资成本低,只需要接种机、接种罐、菌丝块搅拌机及简易无菌箱。由于不需要液体发酵罐进行深层培养,即可以有效控制菌种来源的污染,解决了使用液体菌种污染率高的问题,综上优点还原型液体菌种具有很高的推广价值。[6]5.液体菌种新的层面上的应用
液体菌种的应用早就跳出了只用于生产食用菌子实体的层面,在新世纪里早就得到了更高层面的应用。从食用菌液体菌种发酵产物中可提取出多种生理活性物质,如多糖、酚类、萜类化合物、多肽、生物碱、维生素、核酸、酶、氨基酸、甾醇、具抗生素作用的化合物以及植物激素等,液体菌种中提取的真菌多糖也是广泛销售的保健品;食用菌菌种在液体培养过程中会产生多种生理活性物质具有抗癌、抗病菌、抗病毒、抗衰老、消除炎症、提高机体免疫力等医疗保健功效,某些利用液体培养菌丝体制造的食用菌药物已经上市如灵芝菌片、蜜环片、宁心宝胶囊等;以食用菌为原料,利用其他一些农副产品进行食用菌液体菌种培养生产的菌丝体饮料或加强型饮料,据报道这种饮料味道鲜美,营养丰富;利用食用菌的菌丝体含有高蛋白的特点用来生产绿色食品添加剂。利用液体菌种培养技术生产食用菌营养品、保健品、药品或其他生物制品将是食用菌产业开发的新领域,有着十分广阔的发展前景。
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