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SPR系统产生的空间成像面积随着时间推移 | |||
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剑桥顾问有限公司(英国剑桥)开发的SPR系统,提供改善SPR测量。基于相位差,该系统产生的样本空间成像面积随着时间的推移。结合动力学与Flexchip的SPRimager II系统中,可以观察到了一个区域。涉及表面的相互作用的动力学作为一个例子,示出的移动的结合水平的金表面以及一个椭圆形的底部。
剑桥顾问系统采用了单片式结构,以限制振动的干扰(参见图3)的干涉仪。黄金表面有两个照明区域:左侧区域是光参考区,右边是样本区域。参考区域是用相同的缓冲溶液作为样品区,但没有相关的化学淹没。整个实验过程中,以减少热漂移,这两个区域都保持在相同的温度。
干涉条纹字段被捕获在选择的时间间隔,并在频域上的傅立叶方法处理,得到样本区域的参考区相对折射指数的轻微变化。图4显示了一个示例附带字段和一个产生的空间图像的特异性和非特异性抗体结合的样本区域。为了询问同时两种抗体的样品区域被划分为两个椭圆形而不是一个井。实际上是夸大了的入射角以同样的方式,查看一个圆倾斜使得它出现椭圆孔的纵横比。同样,圆形准直照明形成一个椭圆形的样品区,这些实验为约3.5×6毫米。
已经证明该系统使用两个挑战各孔中相同的蛋白质的抗体结合的差。在左方的抗体以及抗-HA的抗原表位特异性结合的蛋白质上的暴露的顶。相反,一个不匹配的抗体,cMyc,不绑定的抗原表位,并显示小差分信号。
的图像区域中包含两个椭圆形井之间的控制区域,这是实现由聚二甲基硅氧烷掩模。控制区域进行监视,以提供一个直流校正,占热漂移。椭圆形井发生约束力的位置显示出减少的折射率。这对应于一个本地由于各孔中的蛋白结合的抗体,在金表面上的厚度增加。
这种变化的幅度表示的结合量。井反复洗涤的缓冲液,以除去任何非特异性结合的分子,这是监测特异性结合的材料,制得最终的水平。图5示出了三个合适的图像区域的直流校正信号的平均:在左边以及,参考区域在两者之间,以及右侧。与匹配的蛋白质的最终结合的抗体水平的幅度是明显的不同的电平与非匹配蛋白的抗体。其结果是辨别能力的蛋白质,它包含的抗体的结合位点。
系统的另一个例子的空间特征表现出半抗原:蛋白质相互作用的样本区域的右半部分上图案化使用生物素阵列。与液体的整个覆盖范围,绑定发生用亲和阵列中的的三重峰。在图7中的两个例子,是协会解离曲线,表明数组元素之间的结合亲和力的差异。
相位成像此SPR安排??的功能,可以用于检测样品流动的暴露区域上的点阵列中的绑定事件。此功能也可用于监测结合在单独的信道配置在微通道阵列,每个流具有不同的分析物。许多令人兴奋和商业前景的新兴应用SPR每年从不同的研究领域。一些例子包括以下内容:临床诊断,生物武器的病原体检测,蛋白质相互作用研究,蛋白质表达分析,蛋白质 - 药物相互作用分析,疫苗研制,过敏原的食品安全,抗生素残留,或病原体的蛋白质检测和化学检测污染物。
面临的挑战是重新包装的SPR系统到一个低成本的,手持式的,潜在的可支配系统从基于实验室的仪器,而利用基于图像的方法。两所大学的小组开发基于图像的方法,使用相位差信兴高等工程研究所(香港),成大(台南市)。在西雅图华盛顿大学的研究人员也正在开发基于SPR测量唾液中的分析物。有竞争力的免疫苯妥英钠开发利用战略石油储备来衡量不同的处理的预处理唾液样本。
SPR系统的开发和利用,将继续作出贡献新的体外诊断试剂的出现与高感光度。搜索访问全球医疗保健提供商的体外诊断可能会转向使用SPR。在发达世界中的实验室,SPR系统被用来寻找新药,并更好地了解蛋白质相互作用。众多的SPR系统获取商业成熟,导致显着的医疗和科学发现,难以捉摸的等离子体将有更大的影响力超出了以上几个纳米一条细细的金层。
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