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氧化还原酶介导的测量 | |||
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ECD法利用氧化还原酶的标签。9,19氧化还原酶提供信号指示杂交也相媲美的光学方法(参见图3)的扩增。虽然这种方法已被用于微阵列,它已被用于比色法酶联免疫分析(ELISA)年。氧化还原酶也被用在商业上成功的血糖仪。此ECD的方法是简单的,商业上的成功,而且在技术上优于上面讨论的方法。该信号被放大,通过酶的作用,只有小的修改,传统的基因表达的协议是必要的。
ECD输出一个lambda秒杀实验(0.375pM 0.75pM,下午1时05分,中午12时至下午3时,上午9时至下午6时,下午12时)从白血病细胞株的生物素标记的cRNA成一个复杂的样品。盒装黄色区域应结合各种拉姆达穗DNA的。所示的扩展版本的lambda结合的领域之一。其他在芯片上的探针是互补的基因,这是在这个特定的细胞系的任何明示或不表达的特定集合。二十四个重复测定各浓度范围内的(一个范围示出在展开的区域)。荧光和电子化数据有直接的关系目前正在进行(点击放大)。
COMBIMATRIX(华盛顿Mukilteo)正在开发的商业系统,是基于这ECD方法和基于半导体的微电极阵列。的COMBIMATRIX系统可以针对每个单独的电极和测量的信号出现在该电极部位。一个芯片上的一节,每平方厘米有大约1000个电极(见图4a)。一个新的12K版本的芯片每平方厘米有13,000电极(见图4b)。在这两种芯片,每个电极单独寻址,可以在每个站点有独特的低聚物合成。可以通过荧光或ECD方法杂交分析。
图6。一个实际的ECD的原型,已开发(一)。计算机生成图像的手持式发展(二)根据ECD的原型。系统采用微流控技术,以帮助移动样品和探测器芯片解决方案(点击放大)。
在COMBIMATRIX信号放大方法,所附的报告基团通常是辣根过氧化物酶。在过氧化氢的存在下,氧化的酶底物向产物。作为回报,该产品是降低的适当的条件下,上面的电极。由于酶继续创建产品以极快的速度,放大后的信号可以被检测到的电流在电极。例如,为白血病细胞系中的基因表达实验显示ECD的输出的λ尖峰对照组(参见图5)。的数据生成从13K芯片,芯片的特定区域中合成的,其中给定lambda值捕获探针。检出限为0.375 PM生物素化的lambda的cRNA。二十四个重复为每个拉姆达浓度与给定的序列。
COMBIMATRIX制作原型,并正在开发一种更加紧凑,自动化ECD系统(见图6a和6b)。许多反应组分,或前体,可以被存储在一个干燥的格式。长期稳定性研究会进行调查。
结论
这篇文章的目的是到现场全面检讨,而是提供新的检测方法,有可能改变芯片的应用,并催促他们使用的IVD市场的洞察。启用ECD的优点,有可能使微阵列无处不在的工具,不仅在研究和发展,而且临床体外诊断试剂。
参考文献
阿米特·库马尔博士,总裁兼首席执行官,基利安博士莳萝,CombiMatrix公司知识产权总监(华盛顿Mukilteo)。
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