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| 探针的选择铕螯合物为基础的颗粒 | |||
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发展高度敏感性和特异性横流测定的一个关键因素是使用合适的探针具有良好的物理，化学和光谱性质。探头的特性决定了读者发展的许多方面，包括成本，体积，复杂度和性能。时间分辨发光横流测定粒子探测器应具有较强的发光寿命长（例如，超过40微秒）和一个大的环境条件下的斯托克斯位移。他们应该能够被激发的市售的廉价的光源，如发光二极管（LED）。该探针也应以正确的尺寸和表面官能团的表面共价标记的识别分子（如抗体）的单分散。此外，他们应该是化学，物理和光化学稳定的。
铕螯合物为基础的颗粒是一个明显的探针的选择。初步研究。铕颗粒有很强的吸收在365 nm，615 nm处的强荧光，长寿命为500μs，和一个巨大的斯托克斯位移为245 nm。铕均分散粒子的表面的官能团，例如羧酸是可商购自多个企业（如Molecular Probes公司）。然而，有两个主要的性能都使得他们不到理想的时间分辨发光横流测定。一方面，可以有效激发粒子只能由一个365纳米的紫外线的光源，这是昂贵的。另一方面，颗粒在紫外光照射下受到严重的漂白。此外，由于在365-375 nm的紫外线激发，它们可能不适合于安全原因，基于消费者的体外诊断产品。尽管如此，他们仍然是有用的时间分辨发光横流测定。
金佰利已经连着几个抗体共价铕颗粒标记抗体。通过一个样品中分析物的侧流测定条上的检测区由其他固定化的抗体结合物被抓获。当从荧光或UV LED 365-375纳米的UV光激发铕粒子捕获检测区域，从激发光的散射光强和荧光的硝酸纤维素膜延伸400-650纳米。这样的强散射光，使得它难以分离铕粒子通过基于波长的分离技术（例如，光学滤光器）在615 nm处的相对较弱的信号。
然而，铕粒子在615 nm处的荧光信号可以被分离，硝酸纤维素膜的散射光和荧光的通过时间分辨技术。例如，所有的背景信号，如硝酸纤维素膜衰减后40微秒的延迟几乎为零的散射光，荧光，而铕颗粒后，依然强劲的荧光信号的时间延迟，因为它的寿命长（500微秒）。金佰利的实验也表明，全血和血清的自体荧光的时间分辨荧光测量，也可以拒绝。这样一个完整的消除背景无法实现的，其中从背景中，由于波长重叠，分开的发光波长的差异还通过传统的荧光测量。
铕颗粒虽然有许多吸引人的特性，时间分辨荧光横流测定的探头，可以激发粒子通过365纳米的紫外线光源。正如前面提到的，激烈的光源为365 nm不便宜，紫外线是不是安全的消费者为基础的体外诊断产品。此外，365-375-nm的光传输通过硝酸纤维素膜有限。这些缺点限制了使用铕颗粒作为探针时间分辨荧光横流测定的检测灵敏度。
由于缺乏合适的商业探头，金佰利开发一类新的单分散性和表面功能纳米磷光时间分辨发光横流测定与理想的物理和光谱性质。Pt基颗粒100微秒的寿命在390-410 nm（前）在650 nm处，表现出强烈的磷光和Pd基的颗粒在670 nm处有较强的磷光了500微秒的寿命（前400-420 nm）的环境条件下（参见图2）。这些颗粒还具有大的斯托克斯位移（Stokes shift）（这两个粒子280 nm处）。
这些粒子与铕颗粒相比的优点包括最小的漂白，并且能够应用便宜且功能强大的光源，如LED有效激发。此外，背景荧光较低时，为双方共同的生物基质和硝酸纤维素膜在390-420 nm激发，而不是365纳米。虽然发射390-420纳米的光通过硝酸纤维素膜也不够理想，最好是超过365纳米的光，使之更适合为transmissional模式测量。颗粒共价标记的CRP单克隆抗体，并提供了一??个敏感的时间分辨横流测定CRP。
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