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| 重组单克隆抗体使用先进的抗体库和噬菌体展示 | |||
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使用单克隆抗体在试管工具和分析已经被建立。 然而,开发的高度敏感性和特异性单克隆抗体类检测系统可以阻碍的不可预测性和僵化的传统的杂种细胞的技术。 通过的重大进展,在基因工程,创建重组单克隆抗体是现在可能通过使用经过良好测试的噬菌体展示技术。 这种抗体匹配的优势生产单克隆抗体,同时提供传统优势为发展中immunodiagnostic工具包和化验。
重组单克隆抗体与传统单克隆抗体在他们的基本功能。 然而,由于他们是人造完全 体外 流程,他们提供更大的灵活性在他们的生产和更多的优化机会创造后比典型的单克隆抗体。 尽管重组单克隆抗体是一种较新的技术,他们有一个记录在人类的发展在各种研究疗法和设置,拥有超过11000个这样的抗体的产生日期和成功率大于95%。
使用重组单克隆抗体最近开始扩展到试管试验发展更清晰定义的替代品,calibrators多克隆抗体在诊断检测和控制。 本文描述了生产重组单克隆抗体用噬菌体展示技术,随着例子的灵活性,抗体筛查优化和应用的抗体在试管试验开发。
比较传统的单克隆抗体
传统的单克隆抗体是由注射小鼠、大鼠、或兔子与目标免疫原在一段时间的几周。 一旦动物显示足够的免疫反应的抗原,脾是收获,抗体产生细胞永生化细胞系的融合。 以下克隆和进一步测试,个人hybridomas生成提供长期供应个人的单克隆抗体。 在这个阶段,单克隆抗体杂交瘤细胞创建使用传统技术筛查特异性。 整个过程免疫、杂交瘤细胞生产,初步筛选需要2 - 6个月。 后来,个人测试一下他们的单克隆抗体是在特定的免疫测定的适用性。
重要的专业知识、时间和专门的细胞培养和动物设施都需要hybridomas成功创建。 此外,这个过程可能是不可预知的,也不会产生结果,如果目标分子具有有毒或者糟糕的哺乳动物。 一旦一个抗体杂交瘤细胞生产使用传统技术,它通常是固定在其特异性和同形像。 而传统的单克隆抗体可以测序和操纵,这是一个复杂的过程。 此外,杂种细胞输出可能会随着时间变化,和一个失去它的细胞系可以发生在长期存储。
图1。 噬菌体展示的抗原识别网站。 每个噬菌体在图书馆携带遗传物质代表一个特定的抗体绑定网站显示到目标抗原作为噬菌体外套。
重组人类单克隆抗体已被开发来解决这些问题。 已经,久负盛名,重组单克隆抗体已成功地用于各种治疗、研究和诊断应用程序。 技术开发这样的高度特异性,高亲和性单克隆抗体是一个完全 体外 法。 这种方法依赖于一个复杂的基因文库,代表了人类潜在的抗体特异性曲目在管。 抗体绑定序列在图书馆呈现给目标免疫原使用噬菌体展示,这样典型的抗体结合位点是可用的抗原作为一个部分的噬菌体外套而不是两端的抗体分子。 绑定特异性的抗体也直接绑定到其基因序列,可以捕获随着噬菌体(参见图1)。
这种先进的噬菌体展示技术提供了以下好处相比传统的单克隆抗体生产方法(见表我):
基因工程系统用于制造重组单克隆抗体是模块化的设计与准备访问完整描述的DNA序列为促进抗体操纵。 例如,特定的标签进行提纯,固定化,检测可以快速添加到抗体序列,和特定的isotypes或抗体片段可以由替换部件组成。 创建基因融合通过直接加入碱性磷酸酶抗体或其他记者蛋白质也是可能的。
生产安全是提高自重组单克隆抗体绑定信息将保留作为纯化DNA和作为一个电子备份的质粒DNA测序。 DNA是非常稳定的,如果有必要,可以快速重新创建电子序列由基因合成抗体结合区域。 因此,重组抗体可以迅速取代以防损失,提供无限、一致和完全定义的试剂供应。
重组单克隆抗体生产细菌使用自动化、高吞吐量的系统。 这个过程是更容易、更快、更少的劳动密集型比用动物和细胞培养试剂。
重组单克隆抗体生产发生 体外 ,允许更大的余地选择和筛选条件。 例如,抗体可以识别出现的试剂,最终将被用于最后的诊断分析。 此外,选择过程可以直接以调整实现类似的序列特异性为降低或修改格式,如非磷酸化蛋白质的版本。 而传统的单克隆抗体的生产还可以对磷酸化抗原,他们确认后在这个过程中,只有如果他们发生的候选人中产生。
重组单克隆抗体可以进一步优化以严格的选择或额外的回合的突变,从而提高灵敏度有针对性的方式,可以量身定做,以一个测定的要求。
小得多的大量的抗原是必需的,通常0.5毫克或更少。
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