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| 使用LowCross缓冲区可以提高酶联免疫结果的可靠性 | |||
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可以显示测定结果的可靠性，通过精密的档案。临床前研究，FDA要求ELISA验证，包括精密型材精密型材的ELISA与标准缓冲液（PBS / BSA吐温）和缓冲器（LowCross坦率生物科技有限公司，Weissensberg，德国）。一个实验性的治疗性蛋白质药物，测定在有竞争力的格式。在人血清中掺入蛋白质药物，然后用于测量在分析缓冲液稀释为1:750。在检测药物的安全性研究，FDA指定的变异系数（CV）必须不超过15％，在整个测量范围。
比较精密的 档案揭示了显着的程度这酶联免疫吸附，用于在药物研究，检测到一个实验性的治疗性蛋白质（即，候选药物）在人血清中。这是进行了生物素标记的示踪剂的蛋白作为药物在竞争激烈的格式。检测与NeutrAvidin HRP共轭。候选药物在人血清中掺入以测量校准曲线。然后，血清稀释1:750前测量的分析缓冲液中。此ELISA验证只有在使用新的干扰减少缓冲液，在整个测量范围内，可以达到所要求的精度的FDA guidance.12的。
图3。（点击放大）用于免疫毒理学研究对免疫球蛋白的酶联免疫吸附试验豚鼠所示。在标准的试验缓冲液（a）和50毫微克/毫升（1-6）和10毫微克/毫升（7-12）的浓度在LowCross缓冲器（二）稀释的分析物。相当于在检测过程中发展的一个步骤，捕获和检测抗体滴定板乙到G行的标准测定缓冲液（一），特异性控制误报（A行）和空白值（行H）宠坏了解释和评价。使用LowCross缓冲液（B），但是，防止假阳性信号。
来源：，帕拉生物科技有限公司（德国Gronau）。
另一个ELISA对豚鼠的免疫球蛋白，用于免疫毒理学研究，这是一个试验，显示了如何在新的缓冲区，可以帮助避免假阳性结果（见图3）。的山羊抗豚鼠IgG F（AB'）2作为捕获抗体和山羊抗豚鼠IgG（与Fcγ）生物素化的检测器所用的抗体。豚鼠IgG抗体（待测物）稀释的标准检测缓冲区和缓冲区LowCross的。在图中，取值范围1-6表示的浓度为50纳克/毫升，而代表10毫微克/毫升的范围是7-12。
图3中描绘板在检测过程中发展的一个步骤。标准检测缓冲板，可以看出，在采集和检测抗体滴定行乙G.误报特异性控制（??A行）和空白值（排H）宠坏了解释和评??价。的LowCross缓冲区的使用防止了假阳性信号，而且，使检测系列稀释液中的行乙1-6至G和B到G 7-12（参见图3b）。
这两套比较酶联免疫吸附的结果表明新的缓冲区的有效性对矩阵衍生的和未知的干扰影响，导致检测不精确或误报。可以确认的缓冲区的普遍适用性以及在其效力的记录，异嗜性血清。
一个CE认证的诊断方法，对HAMA，ELISA从MEDAC联系（德国Wedel）被用来检测HAMA干扰。这ELISA测量跨桥异嗜性抗体。研究者使用它来测试市售HAMA血清中的面板Scantibodies公司实验室公司（加利福尼亚州Santee）和从in.vent Diagnostica公司联系（Hennigsdorf的，德国）得到的测试和示出一个HAMA的潜力的目的出售受体阻滞剂或HAMA-阻断剂，防止干扰来自如血清。显然，提供商所提供的面板包括范围广泛的不同的和非常关键的嗜异性血清以显示潜在的对HAMA-阻断剂和可能出现的问题从嗜性病人血清。
图4。（点击放大）选择性结果缓冲区上LowCross HAMA反应的效果，量化的研究使用的HAMA-ELISA MEDAC GMBH（德国Wedel）。新缓冲区推HAMA反应在所有血清样品下40-ng/ml在产品说明书中规定的截止明确检测反应。
当完整的板进行了测试，每一个异嗜性的干涉效应被克服的干扰减少缓冲区。低于40毫微克/毫升，表明不存在干扰效应的信号，根据对HAMA-ELISA手册。简短的研究表明，简单地通过从标准品稀释缓冲液（名为MEDAC室女-DIL）切换到新的测定缓冲液中（参见图4），可以有效地最小化干扰。
重要的是要注意HAMA-ELISA的阳性对照仍为阳性与LowCross缓冲区，而不是推下截止。（这些数据在图中未示出）的阳性对照是不哈马斯，但交联的二抗（山羊抗小鼠IgG抗体）。这表明，从正常的检测抗体的信号而受到负面影响的新的测定缓冲液。
应用潜力
免疫处理医疗问题，不同显着所需的答案。
检测抗原检测传染性疾病的检测检测甚至非常低的浓度的抗原，例如，病毒颗粒。既不漏报，也不是可以接受的误报。检测抗体可以表现出极高的亲和力与KD值在10-11或10-12米的范围内，每一种干扰，应该大大降低，为了得到最可靠的诊断。良好的可靠性在最初的测试中，可以最大限度地减少成本的关键感染的二线测试。对于感染性疾病的检测，测定抗体和干扰结合的亲合性的亲合性之间的差异是非常大的。
另一方面，自身免疫性疾病检测和过敏测试地址不同的医疗问题。在这些实验中，患者的自身抗体或过敏性抗体，不显示非常高的亲和力应该被检测出。病人具有中等亲和力的抗体可以是疾病结构的一部分，因此，应包含在该信号甚至中等亲合力结合。
完全不同的医疗需求传染性疾病检测对过敏性测试表明，有必要为不同程度的减少干扰。显然，有很强的干扰降低的解决方案实现了最大的安全性。然而，在这样的浓溶液，测定抗体表现出非常高的亲和力。换句话说，一个具有非常强的干扰减速进行的测定具有非常高的耐任何种类的干涉。较温和的干扰降低，更多的干扰的影响会发生，即使使用的干扰减少缓冲区。但是，这样一个温和的干扰减速，甚至中等亲和力的病人抗体可以正确检测。
图5。（点击放大）影响类风湿血清HAMA-ELISA检测缓冲液（MEDAC VIR-DIL）相比于交联反应的的各种配方的LowCross缓冲的。交联，会导致免疫诊断试剂中的错误的结果。新缓冲区的所有的制剂可以防止不必要的类风湿因子和检测抗体之间的结合，根据交联的亲合性。检测抗体和分析物之间的结合是较高的亲和力。
为了满足不同免疫诊断需求，坦率生物科学提供LowCross的缓冲区免疫诊断试剂制造商指定为轻度，经典，强的配方。的经典制剂提供了测定抗体的亲和力和大多数干扰效应的强度之间的最佳折衷，并适用于大多数应用。为专业用户，如免疫诊断试剂制造商创建的先进配方温和强，有特殊的应用需要。所有三种配方可以推干扰效应的交联反应HAMA-ELISA截止40-ng/ml（见图5）来自下类风湿因子血清，但经典和强有较大的影响，从而导致检测具有更好的可靠性。这些试验结果表明，这种新的缓冲区方法不仅可以普遍使用，但也适应具体的实验和临床要求，如果需要。
这种干扰减速动作模式是低和中等的亲和力结合（干涉效应），一方面，高亲和性结合（检测抗体对分析物）的另一区别。因此，它是不是一个受体阻滞剂的某些物质，而是亲和鉴别。如果太多的HAMA是在患者的样品中，这不能被阻塞过于低浓度的HAMA-受体阻滞剂。然而，没有观察到这种效果，因为它的作用方式不同的新的缓冲区。虽然HAMA-阻断剂可能会对给药的浓度过低，新的亲和鉴别器的性能是不依赖于病人的具体HAMA浓度。这进一步增强与新的测定缓冲液中做的检测的可靠性和鲁棒性。
结论
描述的研究在这篇文章中展示，亲和鉴别一个新的缓冲区有可能处理具有很宽的频谱的干扰。减少干扰，提高了检测的可靠性。FDA要求非常高的精度水平进行临床前或临床研究免疫。各种实验已经证明的广泛的潜在的新的测定稀释剂，以确保达到所要求的精度和可靠性。
直到最近，只有特定的和非常有限的，以克服干扰的方法，如HAMA-受体阻滞剂，是可用的。而是一个新的方法，可用于几乎任何类型的干扰，既不限于哈马斯或heterophiles已经开发也没有交叉反应或基体效应。这是普遍的，消除所有这些问题的一种技术。如果必要的话，可以进一步调整，以满足特定的需求。显示其潜在的临床前和临床研究中检测和食品诊断以及人类诊断检测缓冲区。它是被用来在横流测定，酶联免疫吸附，蛋白质芯片和Western印迹试剂盒的生产。
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