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| 生物标志物发展纳米技术为基础的蛋白质检测 | |||
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最近的临床研究表明,早期诊断某些疾病的需要更加精准的检测相关的蛋白质标志物,在浓度存在低于检测限电流诊断免疫测定技术。 1、2 例如,最近的一项研究检查心脏肌钙蛋白I(心肌肌钙蛋白I)水平,黄金标准测试用于诊断急性心肌梗塞,证明存在任何检测心肌肌钙蛋白I的住院死亡率增加有关。 3 一个更敏感的心肌肌钙蛋白i分析可以使一个更快速诊断急性心肌梗死和不稳定型心绞痛的分化从涵盖形式的胸痛。 2 之前的研究也表明,诊断前列腺癌根治性前列腺切除术后复发可以方便检测低水平的前列腺特异抗原(PSA)。 4 - 6
与早期诊断,临床医生可以启动适当的治疗病人,病人预后早些时候可能受益。 此外,最近的评估subpicomolar水平的淀粉样蛋白b派生扩散性的配体(ADDL)脑脊液(CSF)使用一种超灵敏的蛋白质检测分析指出潜在的开发新的试管测试疾病如阿尔茨海默氏症。 7 由于低浓度ADDL CSF(不到1点),检测ADDL使用传统免疫分析检测脑脊液中格式是不可能的。 7 这一先进的检测灵敏度提供了更多的机会去学习新的疾病和人血清标志物的CSF。
Biobarcode化验的
最近的一项研究报道,继德?biobarcode的化验检测蛋白质的目标水平六个数量级低于常规诊断分析(见图1)。 8 本试验利用抗体涂层磁珠捕获和浓缩蛋白的目标。 捕获的目标都贴有标签的蛋白质纳米粒子探测器,是coloaded黄金与针对性的二次抗体和单链DNA(ssDNA)或双链DNA(dsDNA)条形码。 由此产生的磁珠目标金纳米复合物分离磁和水洗去除过剩探针。 DNA条形码是释放复杂,通过杂交,检测表面固定化DNA探针和一个黄金纳米颗粒(见寡核苷酸功能化 图1一个 )。 9
金颗粒的增大,沉积银,光散射粒子的检测与Verigene读者光学检测系统由Nanosphere Inc。(诺斯布鲁克,IL)。 10 检测一个特定DNA条形码序列表示一个特定的蛋白质的存在。 增加的敏感性是派生的部分从释放多个条形码/捕获蛋白质的目标。 8 条码的数量释放取决于大小的金颗粒,直径15纳米金粒子包含100 DNA条形码。 11 进一步提高灵敏度是由探测光散射从银放大黄金粒子,使检测的DNA拷贝/ 10000条形码鉴定。 理论分析检出限是大约100被俘蛋白质的目标。
使用抗体针对PSA在模型系统,本研究报告的检测限180份10?PSA(30点)的一个缓冲盐溶液。 8 biobarcode化验的也被检查以检测其他蛋白质的目标包括ADDL脑脊液中,一个潜在的可溶性致病性标记为阿尔茨海默氏症。 7 在一项30患者样本,临床相关的浓度检测脑脊液中ADDL使用biobarcode化验。 此外,多路复用化验出了癌症标记物,包括蛋白质PSA,人类绒毛膜促性腺激素(一个睾丸癌标记)和甲胎蛋白(一种肝细胞癌标记)。 12 多路复用的化验使用不同的DNA条形码序列与标记特定的抗体coloaded每个金探针作为指标对不同的蛋白标记物。
最近的一个调查,描述了一个替代方法来标记蛋白质的目标捕获到抗体涂层后的磁珠。 13 代替一个coloaded黄金粒子,这种方法利用一个生物素化的二次抗体标记与链霉亲和素涂覆金纳米粒子和生物素化的ssDNA条形码(见 图1 b )。 一旦ssDNA条形码被免除复杂,DNA被检测到上述coloaded探针格式(见 图1 )。 使用生物素链霉亲和素的方法,绝对的检测极限0.01 pg / ml PSA(10成品/毫升,大约300点浓度)是实现一个优秀的剂量响应在磷酸缓冲盐。 13 鉴于等效亲和力的抗体,这种检测格式可用于其它临床相关的蛋白质标志物。
先前报告的分析结果biobarcode PSA使用模拟样本,包括游离PSA飙升到磷酸缓冲盐的解决方案包含洗涤剂和/或牛血清白蛋白。 这项研究的目标是测量检测?限制的生物素链霉亲和素biobarcode化验使用总PSA(tPSA)飙升到人类血清样品,并比较它与商用检测平台。 在病人血清和前列腺癌,约90%的PSA相关antichymotrypsin(ACT),以形成一个PSA法复杂,其余10%是免费的诗篇。
援助在标准化测试结果,世界卫生组织(世卫组织,日内瓦)开发了一个总PSA标准(NIBSC、代码96/670),由90%和10%免费PSA法复杂PSA来模拟疾病状态。 这个标准是用于研究上面所讨论的。 两种形式的PSA同样可以被选中的PSA抗体对用于这项研究。 13 此外,内生PSA水平以女性血清和一组系列样品的男人,经历了根治性前列腺切除术和/或救助放疗为了评估的效用分析使用临床样本
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