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| 基因组学已经被诊断LabCD盘发展的焦点 | |||
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成套on-disc方法开发了DNA提取、PCR扩增,质粒制备、和SNP检测(见表2)。例如,图8显示了LabCD盘用于质粒DNA隔离。 样品进行细菌培养,通过一系列的移动渠道,计量阀,过滤器来溶解和分离DNA。
在一系列的实验中,大肠杆菌LabCD盘结果与萃取相比使用迷你工具包的质粒提取试剂盒(Venlo、荷兰)。 5-?l文化样本应用于阀瓣,和不同阶段的溶菌作用,洗涤、过滤和收集提取的DNA进行旋转计划从300 rpm,最后900 rpm超过10分钟。 由此产生的DNA被使用与plasmid-specific PCR引物从阀瓣和放大,Qiagen-extracted与扩增的DNA。 DNA凝胶电泳的放大显示,LabCD方法匹配的DNA提取试剂盒包(参见图9)。凝胶上的DNA带的身份建立了放大和运行一个已知(购买)质粒的样品。
四个人质粒隔离单位可以放置在一个LabCD盘。 与其他LabCD化验,LabCD质粒盘需要较少的样本和试剂卷比当前DNA提取所需的方法。 这LabCD也可以更快地完成提取,在自动sample-in,product-out格式。
LabCD发展的质粒为基因组DNA的隔离阀瓣和修改光盘从血液导致发展的总DNA提取、PCR扩增盘:LabCD-PCR加上圆盘。 这个LabCD可以包含16 DNA提取和放大单元通过使用5 - 10?l样品(如。标准品 、血、文化等),20到30分钟可以完成整个过程,根据PCR的循环次数。 许多研究已经描述了这盘的设计和功能。 6、9、10
样品(5?l)的文化或生物流体应用于阀瓣。 使用专用旋转计划,10毫米的5?l样品细胞溶解在氢氧化钠在95°C 1分钟释放DNA和蛋白质变性。 5?l的DNA溶液中和16毫米tris-HCl(pH值7.5),和混合的8 - 10?l PCR试剂和底漆。 盘上的DNA是放大与热敏电阻加热元件在一个旋转的滚筒包含两个每个分析热电装置。 阀瓣可以容纳16个人微流体结构,允许16同时放大反应。
图10。 ( 点击放大 )On-disc大肠杆菌基因组DNA的提取和放大。 disc-amplified DNA完全相同的DNA放大使用标准thermocycler方法。
在一个例子中,2 -或10-?l样本的DNA(8××103或103细胞)提取的大肠杆菌在盘上。 PCR扩增进行使用漆底漆,目标422 - bp lac我阻遏蛋白序列编码,和EcoCtl底漆,放大一个随机选择的300 - bp序列。 On-disc放大使用变性步骤(95°C,2分钟)和35放大周期(退火60°C 30秒,在72°C扩展30秒,30秒和变性在95°C)。 盘的放大DNA被发现和分析使用ethidium bromide-stained琼脂糖凝胶电泳。 on-disc放大DNA与台式放大用ptc - 100 Thermocycler MJ研究(沃尔瑟姆,MA)(见 图10 )。
微流体提供了一种新方法的快速分析临床和药物分析物在各种排列和多路复用格式集成样品制备,试验和最终产品检测在同一个平台。 微流体分析的低量和快速的反应时间可以减少成本和昂贵的试剂,样品制备和分析的复杂性。 微流控分析平台的主要挑战是制造成本和可再生的性能。 克服这些挑战的关键是开发设计,最大限度地减少不一致的性能和简化了大规模生产。
本文中描述LabCD地址和满足这些挑战没有移动部件,只有依赖离心力驱动试验反应。 这些属性也使转让LabCD设计到大规模生产注塑,生产在生产运行成千上万的可复制的光盘。 与自动化合成和检测系统,LabCD建立了微流体可以应用于广泛的试管和分析系统。www.gjbzwz.com
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