1 仪器和试药
仪器：Agilent 1100（四元泵）高效液相色谱仪；UV3210紫外分光光度计；试药：甲醇（色谱纯），水为纯化水，其他试剂均为分析纯。补骨脂素和异补骨脂素对照品，供含量测定用，由中检所提供。样品：补骨脂药材购于广东清平中药材市场。
2 方法和结果
2.1 紫外吸收波长的研究分别取补骨脂素和异补骨脂素对照品溶液在200~400 nm波长范围内作光谱扫描，结果补骨脂素和异补骨脂素在245 nm处均有最大吸收，故本含量测定项选择245 nm作为检测波长。
2.2 色谱条件色谱柱：IntesilODS-3柱（5 μm,4.6 mm×250 mm），流动相：甲醇水（48：52）；流速：0.8 ml/min。检测波长：245 nm；柱温：25℃。补骨脂素和异补骨脂素的tR分别为15.9，18.2 min。
2.3 线性关系考察精密称取补骨脂素和异补骨脂素对照品各12.5 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，精确吸取上述对照品溶液1，2，3，4，5 ml分别置于25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取上述对照品溶液10 μ１进样测定。以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，线性回归方程分别为：补骨脂素Y=382 4X+0.8,r=0.999 7；异补骨脂素Y=429 2X－4.533 4，r=0.999 9；结果表明：补骨脂素和异补骨脂素在进样量0.2~1 μg范围内时呈良好的线性关系。
2.4 对照品溶液和供试品溶液的制备
2.4.1 对照品溶液的制备精密称取补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，加甲醇制成每毫升各含50 μg的混合溶液，即得。
2.4.2 供试品溶液的制备取本品1 g研细，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿适量，加热提取4 h，放冷，提取液回收至干，残渣加甲醇使溶解，置于10 ml量瓶中，甲醇少量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2.5 精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，连续测定6次，计算补骨脂素和异补骨脂素含量。结果表明6次测定结果的平均值分别为1.47，1.72 mg/g，RSD分别为2.5%和2.8%。
2.6 稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，每间隔1 h测定1次，共测定5次，再过24 h测定1次，结果表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重复性实验对同一批样品6份，依法测定，平均含量分别为1.55 mg/g，RSD 2.4%；1.83 mg/g，RSD 2.6%，结果表明本法的重复性较好。
2.8 回收率实验精密称取已知含量补骨脂药材约1 g ，精密添加补骨脂素和异补骨脂素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算回收率，结果平均回收率分别为97.5%，RSD为2.8%；98.8%，RSD为2.5%（n=5）。
2.9 样品测定精密吸取供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，测定补骨脂素和异补骨脂素含量，结果5批平均含量补骨脂素1.32 mg/g，异补骨脂素1.65 mg/g。
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