生成N羟基琥珀酰亚胺酯、环氧基等活性基团直接与各种配体偶联。引入间隔臂的基质与配体结合时，另外也可以通过进一步的活化处置。配体就可以离开基质一定的空间，从而可以减少空间位阻效应，易于与待分离物质结合。
由于配体结合在基质上，亲和层析中。与待分离的生物大分子结合时，很大水平上要受到基质和待分离的生物大分子间的空间位阻效应的影响。尤其是当配体较小或待分离的生物大分子较大时，由于直接结合在基质上的小分子配体非常靠近基质，而待分离的生物大分子由于受到基质的空间障碍，使得其与配体结合的部位无法接近配体，影响了待分离的生物大分子与配体的结合，造成吸附量的降低。解决这一问题的方法通常是配体和基质之间引入适当长度的间隔臂”即加入一段有机分子，使基质上的配体离开基质的骨架向外扩展伸长，这样就可以减少空间位阻效应，大大增加配体对待分离的生物大分子的吸附效率。加入手臂的长度要恰当，太短则效果不明显；太长则容易造成弯曲，反而降低吸附效率。
R通常是氨基或羧基，n一般为212例如Pharmacia公司生产的AHSepharos4B和CHSepharos4B就是分别将1,引入间隔臂分子常用的方法是将适当长度的氨基化合物NH2CH2nR共价结合到活化的基质上。6乙二胺，6氨基乙酸与CNBr活化的琼脂糖反应引入间隔臂分子。二者的末端分别为氨基或羧基，通过碳二亚胺的缩合作用可以分别与含羧基或氨基的配体偶联。
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