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| 免疫荧光技术是以荧光色素标记抗体或抗原 | |||
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| 免疫荧光技术是以荧光色素标记抗体或抗原，使之与相应的抗原或抗体发生特异性结合，并借助于荧光显微镜观察产生荧光的抗原抗体反应。在实际工作中常以荧光色素标记抗体，故又称荧光抗体法。由于本法具有快速、敏感的特点，已广泛用于病毒学、细菌学、免疫学及环境学各个方面。 (1)原理 荧光色素是一种染料，它本身不发光，但能在紫外线或蓝紫光照射下，能吸收光量子而激发能量，发出较激发光的波长更长的荧光。当色素与抗体结合后，荧光特性不改变，被结合后的抗体其免疫学特性也不改变。因此，可借荧光显微镜检查荧光的产生来确定抗原抗体反应。 (2)方法 荧光抗体染色的基本方法有三种类型。 ①直接法 荧光色素标记于特异抗体上，直接检查未知抗原，如待检物为相应抗原，则可形成荧光色素抗体和抗原的复合物。 ②间接法 将未知抗原先加未标记的已知特异抗体，再加标记荧光色素的抗免疫球蛋白抗体(抗抗体)。如待检物为相应抗原，与未标记的已知特异抗体结合后，则荧光素标记的抗免疫球蛋白抗体与上述结合物中的特异抗体相结合形成抗原抗体荧光抗免疫球蛋白抗体复合物。间接法中有两对抗原抗体系统，即待检抗原与未标记的特异抗体和未标记的特异抗体与标记荧光色素抗免疫球蛋白抗体。故此法又称双抗体法。 ③补体法 补体具有能结合在任何免疫复合物上的特性。故当未标记特异抗体与待检抗原反应后，加补体使其结合，再加荧光素标记抗补体抗体，形成抗原-抗体-补体-荧光标记抗补体抗体大分子复合物。 上述三法中，直接法最为特异，但一种标记抗体只能测定一种相应抗原，故每检查一种抗原必须制备与其相应的标记抗体;间接法比直接法敏感10～40倍，标记一种抗免疫球蛋白抗体能检查多种抗原抗体系统，但方法较麻烦，干扰因素较多；补体法更为敏感，一种荧光抗补体抗体，可检查多种抗原抗体系统，且不受免疫血清来源的动物种属限制，但非特异性反应也多，方法较繁。 |
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