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协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似 | |||
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金黄色葡萄球菌细胞壁上的A蛋白(SPA),具有和大多数哺乳动物IgG的Fc片段发生非特异性结合的特性,而IgG的Fab片段暴露在菌体的表面,仍保持抗体的活性,当与特异性抗原相遇时,IgG的Fab片段便与抗原结合起来,从而由抗原把已标记有IgG的SPA菌相互连接,而引起协同凝集反应。其特点是既保持了标记抗体的特异性,又提高了抗体的敏感性。含A蛋白的金黄色葡萄球菌在反应中起到载体和“放大器”的作用在凝集反应中,金黄色葡萄球菌菌体成了IgG抗体的载体,称为协同凝集反应。本反应也可用于检测微量抗原。标准品
方法如下:
(1) 10%葡萄球菌菌悬液的制备 CoWanl株葡萄球菌接种于柯氏瓶,37℃培养18~24h,用PBS洗下菌苔,2500r/min离心20min。沉淀菌用PBS洗2次后,用0.5%甲醛(用PBS配置)在室温中固定3h。置于80℃水浴中4min以破坏菌体的自源性分解酶。再用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液。
(2) 致敏葡萄球菌 1mL10%的菌悬液加0.1mL,伤寒杆菌O抗血清充分混合,放人37℃水浴中30min (中间需摇动2次)。取出后经2500r/min离心20min,弃去上清液,沉淀菌用PBS洗涤2次后配成10%菌悬液。
(3) 协同凝集试验
①取伤寒杆菌O可溶性抗原一滴致敏葡萄球菌菌悬液,一滴在载玻片上混匀,观察约2min。一般在几秒钟内即可发生凝集。
②滴一滴致敏葡萄球菌菌悬液于玻片上,用接种环取伤寒杆菌O菌培养物少许置于悬液中,使成均匀孔状,观察约2min,记录有无凝集。
③用伤寒杆菌。菌培养物与未致敏的葡萄球菌菌液或用痢疾杆菌培养物与致敏的葡萄球菌菌液做玻片凝集,均为阴性反应,不出现凝集。
金黄色葡萄球菌细胞壁成分中的A蛋白能与人及多种哺乳动物(猪、兔、羊、鼠等)血清中IgG 类抗体的Fc段结合。IgG的Fc段与SpA结合后,两个Fab段暴露在金黄色葡萄球菌菌体表面,仍保持其抗体活性和特异性,当其与特异性抗原相遇时,也出现特异凝集现象。
协同凝集试验与间接凝集反应的原理相类似,但所用的载体为金黄色葡萄球菌。这种细菌的细胞壁中含有A蛋白(SPA),SPA 能与特异性抗体IgG 的Fc段结合(IgG3除外)医学教`育网搜集整理。抗体的F(abˊ)2 段暴露在葡萄球菌的表面,仍保持与相应抗原特异性结合的特性。当这种葡萄球菌与IgG抗体连接时,就成为抗体致敏的载体颗粒,若与相应抗原接触,即出现反向间接凝集反应。可用于细菌、病毒、毒素及各种可溶性抗原的检测。
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