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| 链霉抗生物素蛋白的结合容量的测定使用 | |||
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放射性氚含量：生物素最早的类型的链霉抗生物素蛋白的结合容量的测定使用125 I-，14 C-或3 H-标记的生物素作为示踪剂。由于这些化验简单，他们仍然被广泛使用的今天。放射性物质的比其他的检测手段具有一些明显的优势，因为它会导致只有很轻微的变化的标记抗原（一个氚标记的生物素作为非放射性的生物素分子的大小具有相同的）的结构，容易量化，并且是简单的检测。2，这使得这些材料的使用非常方便的小分子的结合反应的研究。此外，一个大的生物素化的分子可以被放射性标记的，很容易地确定为较高分子量的配位体，如免疫球蛋白链霉亲和素包被的微球的结合能力。然而，决定使用一个看似简单的放射性检测作为主要的生物素结合容量检测之前，用户应该考虑低比活动等复杂因素，甚至125 I标记分子的不稳定性质一些放射性修改分子;使用这种测试所涉及的监管压力和约束，需要专门的检测设备。
有两种常用的方法，这种类型的测定。第一种方法是用过量的放射性标记的生物素结合能力计算中孵育不同量的微球。也许更常见的方法是用一定量的微球生成Scatchard图孵育不同量的放射性生??物素。一个版本的Scatchard图是典型的方法进行定量细胞表面上的受体数（即，结合位点），因此，可以进行修改，用于quantifiying的微球表面上的结合位点的数目（请参阅图2）。我们的方法，以该测定孵育不同量恒定量的氚标记的生物素与链霉亲和素包被的磁性微球，总是在过量的生物素结合位点上的微球的化学计量计算的数。微球，然后水洗，并直接从微球中，用闪烁计数测定放射活性。实际的结合能力是一个转换为每分钟的计数除以计数增加每分钟的总生物素结合的生物素的分数。氚标记的生物素活性的更精确的测量，可以检查运行检测上清液每分钟的计数，确保这个计数，再加上，微球，加起来为原体积的氚标记的生物素的每分钟计数。实施例的Scatchard图，通常用于定量细胞表面上的受体的数量。
 当测量放射性的链霉亲和素包被的磁性微球的结合能力时，我们遇到了一些有趣的考虑因素。我们发现，提供更广泛的基微球大小分布，如磁性粒子由几个主要供应商，可导致不准确和低结合容量值。据认为，这是由于“罚款，”或更小的颗粒，不拉磁铁在相同的时间量作为微球的主要种群。这些罚款理论上可与生物素结合，但不能检测到闪烁计数微球颗粒，从而降低表观结合容量。解决这个误差源的方法之一是使用一个更强大的磁铁，有能力拉微球有一个较低的量的氧化铁，是罚款的情况。 |
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