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可用的CCD成像技术与仪器检测试验能力
      
  可用的CCD成像技术与仪器和IVD制造商的愿望和药物筛选组开发的多波长复用的检测试验能力的快速增长,共同促进的发展,新的1,2 -二氧环乙烷的绿色和发射光谱红移。(CCD相机更绿色和红色的波长光谱敏感。)多波长检测使众多的应用程序,包括免疫,核酸检测,记者酶定量复用。胃蛋白酶原II胃蛋白酶原,我比潜在的临床定量多重发光酶免疫分析法已被证明。该法采用突变体提供不同的发射波长的荧光素酶标记19的同步化学发光检测多个酶或标签的要求不吸收分子,提供离散波长的光发射。最受欢迎的金刚烷基的稳定的1,2 -二氧环乙烷基板商业化,迄今在475-480纳米的范围内发出固有的化学发光。
  最绿色发光系统依赖于能量传递给荧光或荧光素衍生物。能量转移系统不能被用于同时检测多种酶。的1,2 -二氧环乙烷AP提供的可见光谱中的绿色区域的发光波长的基板最近被描述。
  该衬底,BZPD,苯并噻唑磷酸二氧环乙烷,是一种无色,无荧光,且稳定,断裂后,观察到550nm的发射最大值。使用北极星HTS工作站CCD成像平台(Applied Biosystems公司;贝德福德,MA),它已经可以同时测量从星Galacton-β-半乳糖苷酶催化分解AP催化分解BZPD和蓝色发光的绿色发光发射在最大为475 nm。使用这些基板,3.0 ? 10 -19摩尔的AP中可检测到的存在下可达6.4 ? 10 -16摩尔的β-半乳糖苷酶,和3.2 ? 10 -17摩尔的β-半乳糖苷酶的存在下,可以检测到高达1.0 ? 10 -17摩尔的AP。
  第三代的Galacton-Star基板,由于其降低的pKa值,允许使用的β-半乳糖苷酶作为酶标记的膜印迹应用。21,22使用Galacton-Star和一个β-半乳糖苷酶和AP标记抗体与AP基板,两个蛋白抗原在一个单一的膜杂交的顺序的双检测已经实现。23可用的绿色发射BZPD的使两色可复用的膜固定化的蛋白质和核酸的化学发光检测。
  最近,已经合成了发射红色和黄色的光的1,2 -二氧环乙烷分子。螺[1,2 -二氧环乙烷-3,6'苯并(三)色烯的化学诱导分解]用叔-二甲基硅氧基触发上面的2'位会导致低效率的黄色光发射24分解3 -乙氧基一个苯并环(二)呋喃-2 -基或苯并(二)噻吩-2 -基取代的4,4 -二异丙基-1,2 -二氧环乙烷和具有5 -或7 -位上的甲硅烷氧基触发发射红光615-628纳米的范围内。25化学分解诱导中的二甲亚砜存在下,用四丁基氟化铵。红色发光分子在多通道生物分析其潜在的应用是特别有趣的。
  一类新的红色发射的用于碱性磷酸酯酶的化学发光底物已经研制成功。捷光的CCD(物Lumigen Inc。)的26位化,它们提供了在任一解决方案为基础或基于膜的检测方法,高效率的持续发光。在这些衬底包含从芳香族硫酯5,5' - dimethylluciferin一个的环外enolphosphate来自的。去磷酸化产生瞬态dioxetanone中间体分解产生橘红色的光。超过5日志的线性检测已被证明与IMMULITE第三代TSH测定试剂盒中使用这种类型的衬底,并用基于膜的检测27。
  另一个类的AP底物的化学发光物Lumigen APS销售,也能够被用在任何一个解决方案为基础或以膜为基础的检测方法。这些9,10 -二氢吖啶基片28,29的去磷酸化产生的瞬态dioxetanone中间体。这些基板提供峰值信号的快速发展和持续发光。
  药物发现应用1,2 - 二氧杂环丁烷基板的药物靶标发现研究和高通量药物筛选的使用很普遍。此外,越来越多的基板受聘于功能分析,基因组学和蛋白质组学的努力。应用范围包括记者基因检测,以监测基因表达,第二信使定量,蛋白激酶检测,蛋白质相互作用分析。定量环磷酸腺苷(cAMP)的免疫系统提供。
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