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| 克服灵敏度限制横向流动免疫分析标记技术 | |||
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免疫分析测试，利用一种抗体的特异性结合抗原。免疫学技术的主要特点是适当的标记的抗体或抗原。这个标签可以创建一个信号，与免疫反应并允许感兴趣的分析物的检测。在实验室实验中，各种洗涤步骤需要除去游离的标记或未标记的反应物和允许的范围和标记的反应物的分析物的检测。试验结果进行校准曲线比较，量化。
相反，著名的横向流动免疫分析（lfias），如怀孕测试，不需要洗涤步骤。在侧流试验系统，抗原抗体反应，以及过量的反应物的去除，通过色谱分离发生。检测试剂（例如，标记抗体）和样品吸液芯通过测试条片或膜。在捕获线，检测试剂与捕捉剂的相互作用，它已被固定在膜。试验结果是视觉评估，通常由两个线的测试线和控制线。
与其它免疫分析格式的lfias相比，主要优点是使用方便；除了分配的样品，没有额外的处理步骤通常是必要的。因此，lfias可以通过nontrained用户和现场使用过程中样品的采集容易。测试的简单，搭配他们的快速返回的结果（2–15分钟），这意味着测试的成本效益。
尽管有这些优点，lfias往往局限于筛选中的应用。这是因为lfias，在其目前的形式，是不容易量化，不适合某些应用是足够敏感。本文将研究横向流敏感性的相关问题，探讨特殊的标记方法可以克服格式的局限性。
标记方法第一个方法是在20世纪50年代末进行的。他们被归类为放射免疫测定法，使用同位素131I，其高灵敏度增加测试时间，作为一个标签。1要执行这些类型的测试，闪烁体组成和防护设备的要求。作为一个结果，现场测试是不可行的。即使如此，在20世纪70年代后期，固相免疫分析131I作为标记开发。2该测试系统，这是在一个流动装置进行通信，可以被认为是一个现代的侧流技术的先驱。
在上世纪80年代，出现的酶标签。这些高度敏感的测试可能不需要广泛的安全要求。3今天，我们不能想象没有这样的酶联免疫吸附试验（ELISA）免疫指标分析。在一般情况下，过氧化物酶标记免疫试剂用于这些测试，和信号是通过添加适当的底物溶液后产生免疫反应。信号强度可以测量光度法和它与校准曲线比较量化。膜为基础的检测，另一方面，碱性磷酸酶标签通常是由于底物转化产生的颜色视觉可以检测。4然而，结果通常是难以量化的。在理论上，它可以使用酶标记lfias，但是开发一个可读的颜色所必需的过程是不可行的在实验室外。
荧光和化学发光免疫分析也得到了发展，以及适当的读者。虽然这些标记技术可用于lfias，复杂而昂贵的检测设备的要求限制了这种测试市场。同使用顺磁性颗粒作为标签是真的。
为lfias，标签如胶体金，碳粒子，或乳胶珠，使视觉检测没有额外的读者，被使用，但与酶的底物转化的标签，无增强效应是可能的。因此，由于抗体粒子的比例相对较高，只有较低的灵敏度是这样的标签了。
局限性与其它免疫分析，一个lfia灵敏度的测试中使用的抗体的亲和力的影响。在最佳生理条件下，一种抗体的亲和常数是有价值的，不能被改善时，负责测试的灵敏度。这是不变的情况下，生化抗体。然而，如果抗体标记，这可能导致的空间位阻的限制，造成改变，甚至完全丧失，亲和力。5
生化指示标签，如酶或荧光团，通常使用的抗体的主要结构的赖氨酸残基的反应性氨基。如果这种共轭影响抗体的亲和力，标签可以采用羧基谷氨酸或天冬氨酸残基。6在无标记如金的情况，可能会有一些抗体的亲和力下降。因此，最佳标记条件必须凭经验确定。然而，需要注意的是，许多抗体的重要，当使用视觉标记的方法，不提供必要的高亲和力常数（即使未标记的）需要满足所需的各种分析物的检测限为。
除了抗体的亲和力，有大量的其他条件可能会限制免疫测定法的灵敏度。7除了样本矩阵和抗体标记，膜或垫可以对测试结果的影响。在硝酸纤维素膜上，例如，芯吸速率在测试过程中起着关键的作用。一般而言，较高的芯吸率，灵敏度较低，尤其是当使用具有低亲和常数的抗体。
的灵敏度也可以通过测试的设计问题，如膜厚度的影响，膜的预处理，并对固定化和标记的反应物的浓度。这意味着，例如，这一损失由于膜问题的灵敏度可以通过增加的固定化抗原浓度对膜和标记抗体的补偿。然而，这通常需要增加试剂的体积，因此，增加的成本。这也可能导致的损失的特异性和较高的检测背景。
虽然许多不同的lfias已被开发，滥用检测妊娠试验和药仍然是最常见的和众所周知的。一个很好的理由，这些流行的测试中经常使用的尿液样本矩阵。由于它的盐含量和中性pH值，尿提供了几乎最优条件稳定性和亲和力抗体。如血液或唾液复杂的矩阵也提供生理盐和pH值条件下，但也含有高量的蛋白质，脂类，和多糖。这些物质可以与实验室样品制备方法分离，但现场试验，对样品制备的需要，应保持在最低限度。
另一种是特殊的样品垫，可以去除干扰物质的使用。用于食品和环境样品的测试，在更大的样本的纯度是必要的，特殊的缓冲条件必须创造必要的生理条件下的测试。为了实现这些是通过稀释样品缓冲液中的最简单的方法。然而，这样做，也往往冲淡分析的兴趣，导致亏损的灵敏度。
在克服lfias灵敏度的限制，还需要搭配不同的测试组件。除此之外，因为抗体的亲和力是有限的，一个测试的灵敏度可以增加通过使用不同的标签。用于荧光，新的和高度敏感的读者发光的发展，或顺磁性标签已经创造了新的机会。但这些测试往往是更昂贵，由于规模和复杂性的读者，是有限的现场测试。
实现更强的信号，另一种方法是增加抗体的标记密度。以下描述的荧光标记的光学读取immunodipstick法（佛罗里达州）技术，一种新型的荧光标记方法，显示了一个高达三个数量级的灵敏度增加相对于传统侧流标记方法可以同时仍然能够以一个简单的检测结果，手提灯。
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