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极端敏感性的测试线和控制线的出现 | |||
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佛罗里达州的格式是一个基于标记的生物标志物的使用cibitest公司协议的特殊方法(新乌尔姆,德国)。测试条制造,以同样的方式作为传统lfias,使用标准的设备,如BioDot Inc. BioDot xyz3050平台(欧文,CA)和标准测试条的材料如用Whatman国际有限公司immunopore硝酸纤维素膜(梅德斯通,肯特,英国)。然而,在对比传统的lfias,其中金颗粒或乳胶颗粒作为标签使用的荧光染料,佛罗里达。这个标记技术,一个只有一少部分每兆的检测限可与竞争免疫分析以及直接格式像夹心分析法实现,同时还获得视觉信号。
在间接免疫所示的情况下(例如,lfias使用胶体金),在测试结果的评价没有显着的变化是必要的(参见图1)。当两个线路的测试线和控制线的出现,样品中没有被分析物。如果只控制线出现,对应的截止水平,分析物的存在。
由于,佛罗里达技术采用荧光染料的事实,评估测试条要求的荧光团的附加励磁。然而,由于特殊的标记方法,结果在一个非常强的荧光信号,一个简化的读者是足够用于此任务。插入测试带到手持灯后,测试信号产生的测试和控制线路可以检测视觉(参见图2)。由于其鲜明的信号,佛罗里达州产生快速免疫分析的强烈着色的标本。由于与一个手持灯效果的评价,结果可以在恶劣的照明,甚至在完全的黑暗中。
佛罗里达州的敏感性佛罗里达的极端敏感性可以通过一定的荧光共轭高密度的载体分子,然后结合抗体荧光复杂的实现。的增强作用的结果从荧光基团共轭单抗体的比率非常高。荧光染料的直接结合与抗体(例如,通过NHS酯染料),荧光抗体的摩尔比为约100–提高1000倍。因此,在三个数量级的灵敏度的增加,可以实现。
证明,这种敏感性与亲和纯化的抗血清确定?β-内酰胺类抗生素。如图所示图3该抗血清,采用竞争ELISA以及在佛罗里达州的格式在缓冲溶液氨苄青霉素的检测。ELISA的检测限为约0.5毫微克/毫升,和测试的中点为10毫微克/毫升(10 ppb),有很好的对应,这类试验的期望。为定量佛罗里达的格式,为10 pg / mL的截止值(10个百分点)的测定。这一发现有大约三个数量从传统的金标记的侧流试验的平均灵敏度幅值。8可比的敏感性可以经常只有在实验室环境下实现了放射免疫测定法。但是佛罗里达的系统是一个现场测试,最新的数据显示,在灵敏度这意外的增加连接到特殊的方法结合荧光抗体。
荧光信号的稳定性用于佛罗里达系统荧光耐光性是不是测试性能的一个限制因素。随着冻干的荧光测试杯之前使用存储在黑暗的环境中。可以进行测试,在白天没有问题。即使长色谱最多20分钟不引起光漂白。使用手持灯评估后,条带进行干燥和容易获得的。只要他们都储存在黑暗条件下,信号可以直观地看,即使经过18个多月。
它也有可能对信号的光电方式(例如,使用适当的软件一起电荷耦合器件照相机)。如图所示图4,与零信号相比,增加的荧光背景可以检测。这样的背景信号通常不干扰测试的视觉评估。采用光电检测系统时,适当的截止选择将分离的背景信号从测试信号完全。通过令人兴奋而不是紫外线蓝光荧光团,可能可以降低干扰。然而,可能还有一些标本的荧光会引起强背景信号。例如,一个荧光基团与佛罗里达州目前使用的技术是不适合用牛奶。这是因为一个测试条用牛奶样品和蓝色光激发会表现出绿色荧光,不易辨识。
另一个例子是吖啶测试。这种物质,这是在某些微生物的选择性富集补充(例如,单),也有一个自发荧光干扰测试信号。为了能够使用这些矩阵的佛罗里达州的格式,其他的荧光团与更大的斯托克斯位移正在开发。这样的荧光团发射在一个红色的光谱范围,可以轻易地分辨出绿色荧光。发展中的标签,不断提高检测系统(例如,通过创建,允许读者的客观评价结果)。然而,有一个问题仍然是困难的,或在某些情况下是不可能的,要解决的是标签的增加灵敏度超过一定限度。
通常情况下,检测限较低的部分每十亿范围内发现,有一种特别的抗体可能稍低。相反,可以使用吗啡侧流测定,只能通过改变胶体金标签从佛罗里达的方法,通过100级的测试灵敏度增加,没有任何进一步的优化。唯一的区别是一个简单的读者的要求。由于佛罗里达州的标记方法创造了强烈的信号,不需要非常复杂和昂贵的读者,如与其他标记方法的开发。现有的荧光标记技术,顺磁性颗粒,和其他更奇特的标签提供良好的灵敏度和量化的可能性,当然比黄金或乳胶。然而,对测试系统的成本,以及检测设备,使这些技术只适用于高成本的分析。佛罗里达州的方法,另一方面,使视觉读数与基本的读者,可在低成本的筛选应用具有高灵敏度的需要。
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