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加强检测性能利用纳米检测 | |||
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ELISA试剂盒和侧流检测的检测技术,可以提高灵敏度,同时降低了所使用的试剂的总量。在免疫诊断和核酸检测方法在共同使用的固体表面,其上的生物活性试剂的涂层,如抗体,抗原,或低聚物探针。这种生物大分子复杂的长链结构,拥有最佳的三维构象特异位点的结合位点或表位。然而,常规的生物活性分子沉积到固体表面上是一个低效的和随机的过程。而可以很容易地涂布到塑料表面的抗体,例如,只有一个子集所沉积的分子将具有可用于反应的Fab结合区域(参见图1)。这种随机性的assayís结合能力和灵敏度依赖于传统的涂层技术限制。
纳米智能检测系统(网络入侵检测系统)技术,通过ANP Technologies公司(特拉华州Newark)已被设计为在纳米水平的生物活性分子的取向控制用的聚合物支架共价结合的粘合剂如antibody.1在此共轭结构的聚合物支架优先附着于固体表面延伸表面相差的合算的免疫反应的抗体。的共轭本身的表面上面向纳米抗体分子自组装阵列。其结果是涂覆的表面,具有更大的结合效率。这样的取向控制和自组装的好处,可以扩展到任何生物活性分子。
NIDS技术已被应用到预涂微孔板,创造出一系列高度敏感的工具,可用于药物发现和临床前研究和临床研究。ANP技术开发:NIDS激活链霉亲和素(SA) - neutravidin(NA)涂层钢板名为HyperBind的。生物素化的抗体和其它蛋白质是一种常见的过程,而该时与HyperBind板相结合,以更高的灵敏度和降低试剂usage.2这使研究人员能够不进行所要求的复杂的合成方法的情况下得到网络入侵检测系统的好处纳米操纵,检测到用户的提供。HyperBind板中提供清晰,黑,白等色,荧光和化学发光检测格式格式,分别为。HyperBind板块已经比较许多其他的商业板块。实现共轭链菌素或neutravidin的锚定聚合物支架的纳米定位导致了性能增强。
生物素蛋白直接绑定SA HyperBind板已表现出更大的结合效率生物素蛋白,比其他商业SA板(见图2)。在一个有代表性的实验中,生物素化的小鼠IgG的抗体浓度增加100μL,分别加入的井的HyperBind板,一个Nunc公司防盗系统,一个皮尔斯HBC Reacti-绑定,和一个R&D系统EvenCoat板,和培养上的一小时摇床。洗涤后,向孔中加入100μL的兔抗小鼠IgG抗体结合到辣根过氧化物酶(HRP),并允许一个一个半小时,在一个平台上摇床孵育。在洗涤工序中,由过氧化氢和四甲基联苯胺(TMB)的基板/色原试剂加入到孔中。颜色发展20分钟,并用2N硫酸停止,并在450 nm处测定吸光度。
NA板与的黑色HyperBind SA以及用于基于荧光的检测进行了类似的比较。涂上黑色原料聚苯乙烯??微孔板与链霉和neutravidin的使用NIDS化学为清澈板优化。的结合效率的HyperBind板被证明是优于皮尔斯Reacti-Bind和Nunc公司防盗系统黑色板的使用前面所描述的荧光酶底物试剂(参见图3)与生物素化的小鼠IgG的测试程序时,。
白酒板块也被视为与NIDS激活链霉亲和素的使用基于化学发光的检测。的结合效率的HyperBind板也显示出优于Nunc公司防盗系统白色板时使用的测试程序与前面所描述的生物素标记的小鼠IgG和化学发光底物试剂。
从上面的实验中得出的结论是,对于一个给定浓度的生物素标记抗体添加到微孔中,更多的蛋白质可以比皮尔斯,R&D系统,NUNC板HyperBind清晰,黑色和白色板的约束。这一发现可以转化为更好的检测性能和减少试剂的使用和成本。
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