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体外选择的适配体中的电流的基础
      
  适体出现了三个独立的小组,他们的工作在1990年首次出版的实验努力。杰拉尔德·F.乔伊斯在(加州La Jolla)斯克里普斯研究所的研究小组一直在寻找新的RNA酶的活性。体外突变,选择和放大的研究人员使用分离的RNA酶的功能。这种方法成为体外选择的适配体中的电流的基础。
  拉里·金的研究小组在美国科罗拉多大学(丹佛),试图找出序列的T4 DNA聚合酶在体外。他们的图书馆是基于自然结构,但包括一个随机的8个核苷酸的序列。组命名该专利方法(美国专利5270163)在体外选择“系统进化指数富集的配体(SELEX)??。SELEX过程中可以找出最有选择性的适体酶。
  这一发现,一个月后,杰克·绍斯塔克在美国马萨诸塞州总医院(波士顿)和安德鲁·D·埃林顿报告使用体外筛选分离分子与特定的配体结合的活动。他们创造了一个图书馆100个核苷酸的随机序列的任何已知的寡核苷酸序列无关。目标没有已知的核酸配体的有机染料。这组创造了这个词的适体,其中来自拉丁问博,意思是“以适应。”
  SELEX技术是一种技术,用于隔离功能的合成核酸。它允许对大的,随机的寡核苷酸库的体外筛选的一个反复的过程的吸附,回收,和扩增的寡核苷酸序列(参见图1)。可以访问在网上免费www.isrec.isb-sib.ch/htpselex的高通量SELEX实验小学和衍生数据数据库。
  SELEX过程开始于从图书馆的合成单链寡核苷酸。一个典型的SELEX第一轮将包含10 14 10 15独特的序列。化学合成的单链(β)的DNA,然后通过聚合酶链反应(PCR)扩增,以便产生相应的双链DNA。根据所需的适体,该库被转换成其中的单链DNA链分离或通过体外转录的RNA。单链DNA,然后进行培养与利益的目标。采用的构象,使他们能够与靶核酸,通过过滤分离,通过硝酸纤维素柱的亲和柱(小分子)。的适体目标双链洗脱,通过逆转录-PCR扩增,RNA适体,或PCR的DNA适配子的情况下的情况下。这创造了一个更小的为下一个周期的分子浓缩池。该过程需要8至15次迭代的周期,进行了越来越严格的条件下实现的适体的高亲和力。
  适配与抗体适体,相当于抗体的核酸,具有的特性,使得它们优于抗体使用时,作为蛋白质组学传感器的传感元件(见表1)。抗体鉴定过程取决于动物的主机上。表达过程变得更加复杂时,目标是毒素,这可能会损害主机,或低分子量的分子,它触发一个最小的免疫原性反应。抗体的表现是很多具体的,虽然单克隆制剂已经减少了很多,很多的可变性,编制仍然需要一个漫长的净化协议。
  与此相反,在体外设计的适配体,从而独立于任何动物宿主。适配子来识别使用自动寡核苷酸合成和筛选系统。可以提高分子进化技术或通过设计合理的结合特异性,亲和性,和适配体的稳定性。此外,适体的识别过程中是可以改变的,与特定的目标区域或在不同的约束条件下获得的适体。一旦确定,适体,很容易创建,使用既定的化学合成工艺具有极高的重现性和纯洁性。
  适配体还可以用报道分子标记的,而不会影响它们的亲和力,采用的协议已经建立的寡核苷酸标记。7的适配体传感器可以工作在各种各样的样品基体,包括非生理性缓冲液和温度条件下,典型的抗体制剂变性。适体的相互作用的动力学参数是可以改变的需求。抗体是庞大而复杂的分子,非生理pH值和温度,从而可以限制其使用可重复使用的传感器敏感。然而,适配体可以经受反复循环的变性和复性,不破坏其结构。此外,它们可以在环境温度下运输,而不会降低存储持续时间长,在使用前,进行大量的冷冻和解冻循环。
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