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基质血红蛋白量的测量采用反射率测量的总血红
      
  血样被添加,并通过膜漂洗作为缓冲继续流。此缓冲液还包含一个的洗涤剂,hemolyzes红血细胞,血红蛋白释放。在pH6.5,非糖基化和糖基化血红蛋白的带正电荷的离子结合到带负电荷的基团上的矩阵。此绑定是快速的,并发生血红蛋白移动通过矩阵。在pH = 6.5,硼酸酯基团的结构不利于糖化血红蛋白的结合,因此,结合的血红蛋白作为样品,将包含相同的糖基血红蛋白的比例。甲足够量的缓冲液中加入以除去未结合的(多余的)从基体中的血红蛋白。键合到基质血红蛋白量的测量是采用反射率测量的总血红蛋白。光源的LED在标称波长为430纳米,使用415纳米的血红蛋白的吸收峰进行定量。
  第一次测量后,在pH为9.5的缓冲液,加入通过膜漂洗。血红蛋白的变化,以及离子结合上的电荷正好相反。有利于结合的糖基化血红蛋白的结构,因为它被释放了,带负电荷的基团的硼酸酯基团的变化。硼酸酯基团的结合迅速发生,血红蛋白移动通过矩阵。导致血红蛋白量计量势必矩阵的
  糖化血红蛋白,利用反射测量。这两个结合步骤是快速,允许矩阵适于用流水或侧流方法,图1示出了反射率的变化(%R相对于干燥的带钢反射率)作为测定的进展。当第一个缓冲区中加入(1),反射率下降,因为矩阵变得半透明。血后添加(2),反射率下降的高浓度的血红蛋白通过矩阵移动的前面,吸收光。由于未结合的血红蛋白漂洗通过矩阵(3),反射率增加至一平台,由于在基体中的剩余的离子键合的血红蛋白,是由(A)的反射率测量。当添加第二缓冲器(4),反射率开始下降,然后增加,通过矩阵(5)的非糖化血红蛋白前面的漂洗。的反射率增加的高原,由于残留在基体中的糖化血红蛋白,是由所述第二反射率的测量(B)。的两个反射率的测量(A和B)被用来计算的总量和糖化血红蛋白的浓度。糖化血红蛋白与总血红蛋白的比例是用于计算样品中的糖化血红蛋白的%(如下文所述)。
  所描述的测定法,可以使用2-5μL的样品进行。膜的厚度和血红蛋白结合位点的数量影响最小样本量。测试样品可以是毛细血管,静脉抽血抗凝(通常EDTA),冷冻抗凝静脉抽血,和控制。使用原型系统中,第一种缓冲液85微升55微升第二缓冲器是足够的,以执行漂洗。该测定的时间是约5分。加入第一个缓冲区和阅读湿片空白后,可允许的延迟时间过长,增加血液太多缓冲区传递,和漂洗将是不完整的。因此,在血液试样应添加的读取湿条形反射率在15秒内。加入第二缓冲器的定时不是关键的。
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