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| 考虑各种因素试管autoantigens当选择为他们的分析 | |||
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在整个历史的immunodiagnostics,新的试验设计和策略导致变化的需求的一个关键组成部分:抗原。 例如,在甲状腺自身免疫,此举从免疫荧光,通过血凝酶联免疫吸附测定(ELISA)成为可能通过识别微粒体抗原。 在接下来的几年中,分子生物学技术使识别甲状腺过氧化物酶(TPO)作为分子目标;随后,重组蛋白抗原制备取代了原油本地。
今天,重组抗原通常是第一个也是唯一的选择,这样的标准分析作为ELISA、多路珠系统,immunodots,自身抗体微阵列检测许多。 然而,由于复杂的生物学、重组技术还不能满足特定抗原的要求。 本文将讨论的所有关键方面在选择适当的autoantigens用于商业自身免疫测试。
自身免疫性疾病是通用术语为一组病理临床条件专门的白细胞和抗体,是由病人的免疫系统攻击细胞和组织。 著名的例子包括自身免疫性风湿病疾病如系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎(RA)和器官特定疾病如自身免疫性甲状腺炎和1型糖尿病。
建立自身抗体的存在作为一种重要的临床诊断工具用于免疫性疾病首次达到60年前,研究人员描述了微观现象LE细胞。 1 今天,这第一个抗核抗体(ANA)诊断被认为是概念的诞生在系统性自身免疫性疾病的血清学IVDs。 十年之后,其他研究人员颁发了第一个分析自身免疫性抗体与自身免疫性疾病相关器官具体。 2 又过了十多年前间接免疫荧光显微镜上选定的组织切片可以应用在临床诊断识别大规模系统性疾病。 3
25年前,一个重要的进步是通过引入ELISAs例行自体免疫诊断。 ELISA和其适应用于抗体检测导致重大改进的敏感性和特异性自身抗体测定。 4、5 即使在今天,使用上的方便、灵敏度高、样品处理量的快速ELISA使得有用和不可或缺的工具,自身抗体检测在临床实验室。 6
在1980年代早期,ELISA替代了过去的常规血凝试验检测微粒体抗体,现在被称为传真照片。 然而,它变得明显,ELISA的显著提高分辨率,歧视能力和可再生的量化只能足够用于筛查临床血清样本如果免疫质量和生物化学纯度的抗原ELISA的跟上高分析标准。
到1990年,经典核汽车?抗原如Sm,rnp Sm(U1-snRNP复杂),DNA威尼斯平底渔船?异构酶(Scl 70),我/ Ro,一学生histidyl-tRNA合成酶(乔1)已经被用于化验,即使他们是不可靠的,而不是纯粹地。 此外,小批量大小不允许他们无处不在的可用性。 因为大多数这样的本地抗原是动物来源(比如获得。 ,小牛胸腺),即使有满意的纯度和数量,他们的诊断价值有限。 7
当时,一个重组战略是试图消除这种限制和困难,尽管只有温和的成功。 尽管分子生物学领域已经发展成一个高度动态的纪律,早期通过生产重组抗原(通常为小片段或融合蛋白表达 大肠杆菌 )是不成功的。 非特定的背景信号噪声引起的污染 大肠杆菌 组件导致假阳性结果。
在1990年代早期,日益增长的需求autoantigens定义单一满足不断上升的需求质量而言,纯度,很多很多,结果重现性与批量生产产量增加导致了严重的瓶颈的供应商用抗原。 这个瓶颈也增加了商业生产过程压力开发创新的解决方案来缓解的问题所造成的更大需求为可靠抗原。
在1990 - 1991年,我们公司前,伊莱亚斯诊断(弗莱堡,德国)有困难产生足够高质量的人类从本地资源,TPO适合IVDs。 (增长的原因之一是包括预订从临床伦理委员会)。 此外,遇到不能解决的问题,同时也试图制造这种膜结合抗原recombinantly在 大肠杆菌 。 任何尝试,如果在所有实际可控,recombinantly在哺乳动物细胞表达抗原会太贵。 因此,一个替代方法,收到了很少的关注在临床诊断。 一个策略是建立recombinantly产生人类autoantigens使用真核瞬态细胞表达系统基于重组baculoviruses(Autographa californica多核多角体病病毒)和昆虫细胞(Spodoptera frugiperda,或Sf9)。 8、9
1992年,这Sf9-based表达系统,Diarect取得了突破,这是很重要的,因为TPO其免疫反应性是依赖构象。 10 提供证据的TPO原则适度性的杆状病毒表达系统。 在接下来的五年中,几个目标抗原pro?,包括一定数量的简化安娜/ ENA抗原,这是常规临床诊断需要和ELISA试验系统。 当时,Diarect回顾了利弊的各种细胞表达系统(例如, 大肠杆菌 ,杆状病毒/ Sf9,哺乳动物和酵母细胞),以及他们是否适合表达诊断上相关的目标就不同的分析系统(见 表我 )。
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