购买时请注意选择相应的产品名称
| 诊断测试和化验使用微球基板或支持基于免疫 | |||
|---|---|---|---|
|
微球可用于任何测试或试验之前,他们必须准备绑定和涂有配位体(通常是蛋白质)。 微球的交互与其他测试组件,如过滤、膜,和磁铁,也必须考虑到测试格式和微球的选择。
涉及的分析物部分决定了格式。 分子分子量小于6000,例如,可能会很难发现一个三明治格式,因为许多这样的小分子没有空间两个抗体。 小分子需要有竞争力的分析和测试。 大型分析物,如蛋白质,可以通过直接测量或抑制测试和化验。
通过化验,FDA将优先在工艺验证。 制造商需要解决这个需求在开发过程的早期和选择合适的方法。
测试组件
定制的microspheres-with特殊的化学性质, 1、2 比聚苯乙烯高或低密度,折射率高于或低于聚苯乙烯(亮或暗粒子比浊分析)——那些可用。 由于疏水作用是最可能的机制参与吸附的蛋白质,聚苯乙烯(疏水性聚合物)表面通常有高程度的非特异性蛋白吸附。 因此聚苯乙烯微球时可能不是最好的选择,不会吸附 任何 蛋白质是必需的。 一个例子可能是抗体共价结合的微球,它所有的涂布蛋白一定共价至关重要。 微球表面由高水平的亲水单体,丙烯酸和丙烯酰胺等nonadsorbing最为相象。
二氧化硅微球自然是亲水的,所以没有蛋白质吸附应该是非。 共价连接后,只有所需的抗原抗体反应应该发生。 二氧化硅和聚苯乙烯之间的密度差异(1.96克/毫升1.05二氧化硅和聚苯乙烯)沉降速度的一个关键区别。 因为在水中沉降取决于微球和水之间的密度差异(硅1.96 - 1.00 = 1.00;1.96 - 1.00 = 0.05聚苯乙烯),二氧化硅微球将解决大约19倍聚苯乙烯。 这种差异在沉降速度可以利用一些有趣的测试和分析基于微分建立时间的凝集和unagglutinated微球。
封装的超顺磁的粒子由聚合物/磁铁矿核心密封在一个纯聚合物壳或外层保护敏感酶接触氧化铁。
微球染色聚合过程中或之后在彩虹的颜色。 最初为改进的可见性和染色颜色的歧视,他们现在还与“fluorochromes”染色(单独使用,或几个相同的粒子),“fluorophors”(荧光染料与特定的光谱属性),和scintillators(发出荧光染料暴露在射线或β射线)。 通常只需要少量的这些染料产生一个强烈的信号。
超顺磁的微球可在不同的平均直径、大小分布、表面化学性质和水平的磁铁矿(可调响应磁铁)。 更新的核/壳封装,以防止铁接触敏感的酶或细胞。
将IgA、IgM或免疫球蛋白g被使用? 单克隆(Mc)或多克隆抗体(Pc)? 整个免疫球蛋白g或部分像F(ab) 2 、工厂或支持? 免疫球蛋白g(Fc的部分可以删除,以避免类风湿因子(RF)的干扰,从而导致非特异性的绑定和自身凝集问题。) 当筛选PcAbs化验,请求“浊度测定法和比浊法级”Abs,预选沉淀Abs一样好。这种品质是一种预测他们可能会很好的吸附到聚苯乙烯,也许有利于凝集。
几个因素权衡使用单克隆抗体而不是polyclonals。 单克隆抗体,这通常比polyclonals有较高的特异性,也通常绑定亲和力较低。 Monoclonals也通常不会引起免疫沉淀反应。 这些特征差异多克隆和单克隆抗体与抗体吸附到微球的差异。
现在可以使用一些特殊蛋白质绑定,包括 转导抗体 ——双官能Ab旨在识别抗原和酶。 3 绑定一种酶抗原可能是一些不寻常的测试的基础。 新的“miniantibodies”是二阶阵线抗体片段,生长在 大肠杆菌 通过重组技术。 4 因为鸡抗体不与射频反应,补充干扰消除在测试中使用这些特殊的蛋白质。 5
重组聚合物免疫球蛋白g设计结合IgM的最佳性能和免疫球蛋白g补充反应。 6 低聚物,逐渐形成蛋白质的解决方案(如牛血清白蛋白和免疫球蛋白g)随着时间的推移,吸附在微球比单体更快更牢固。 如果你 想要 寡聚物,等等,或者试图加速老化的解决方案。 有可能创建合成寡聚物交联蛋白或绑定合成聚合物。
与微球研究人员通常认为水是干净的。 但即使商业去离子的水(DI)可以包含离子和有机物种吸附在微球;在这些情况下,微球干净的水,而不是相反。
清洁
前粒子涂以蛋白质用于各种诊断测试和化验,表面活性剂和其他溶质可能不得不被删除。 最统一的聚苯乙烯微球是由乳液聚合使用表面活性剂(通常带负电荷的烷基磺酸盐、硫酸盐,或羧化物)。 表面活性剂吸附在粒子表面;他们给粒子有一个负电荷,从而增加胶体的稳定性。 此外,surface-modified微球(COOH,北半球 2 和其他表面组织)可能含有水溶性聚合物(WSP),可以干扰蛋白质表面的耦合。 WSP,如果存在,取代蛋白偶联反应设计蛋白微球。 Chloromethyl-modified粒子(用氯化vinylbenzyl单体)在高酸性的水溶液(pH < 3);前清洗去除酸耦合可能是可取的。
高度统一的聚合物微球。
虽然在研发过程的早期,它可能是一个好主意使用彻底清洗微球,通常没有必要删除所有在决赛中表面活性剂配方的产品。 这个决定取决于表面活性剂的类型和浓度,所需的蛋白质水平加载,测试或试验设计的类型。 每个系统必须独立评估。
统一的二氧化硅微球是由纯Si(OC 2 H 5 ) 4 对水和氨。 因为纯SiO合成微球 2 ,他们应该 没有 表面活性的杂质,因此应在使用前不需要清理。
大多数polystyrene-based超顺磁的微球是由与羧基acid-containing共聚合苯乙烯单体在胶状磁铁矿;他们可能包含一些WSP。 十二烷基硫酸钠(SDS)添加到确保长期胶体的稳定性。
particle-cleaning方法选择应该不仅能够去除表面活性剂涂层后还剩余的蛋白质。 大多数方法去除表面活性剂或释放的蛋白质。
洗涤。 重复离心法、减压和resuspending水通常是第一个清洁方法。 必须转到微球形成一个紧密的“按钮”,允许清洁分离(倾析)的液体从固体。 颗粒越小,越困难的这种分离。 如果使用刹车停止离心机,粒子可能是部分resuspended减压,他们中的一些人失去了。
卸载后,添加新鲜水或缓冲,应该完全resuspended微球。 有效清洗必须完全redisperse微球。 再悬浮应该进行一些可靠的方法,如显微镜检查或快速检测尺寸分析,验证粒子主要是单一的,只有几个对比。 表面活性剂被移除,微球坚持彼此更紧密;缓冲进一步增强这种效果。 更大的粒子(> 0.8?m)更容易旋转,不太可能牢牢地粘在一起,更容易resuspended。 亲水微球和protein-coated微球后粘在一起不太可能比noncoated离心法或疏水微球。
计算微球所产生的沉降速度和重力(G)部队离心机可以确定执行必要的时间自旋向下一个特定大小的微球。 7 微球< 50海里(< 0.050?m)可能需要> 300000 G沉积物他们有效地(即。 10-cm / hr沉降速度)。
|
| 上一篇：硝化纤维素膜的抗拉强度三种不同的解决方案 | 下一篇：阻断策略在酶联免疫测定中使用的尼龙膜 |
|---|
无法在这个位置找到： xy/left.htm