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| 化学发光法：生物素吖啶 | |||
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化学发光法是化学反应，产生可见光，因此不使用任何光源。因此，需要复杂和低效的光波长的滤波系统被淘汰。化学发光系统分为两类。第一个和最简单的开发使用酶产生的化学发光信号。通常情况下，无论是辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，标签被触发时通过加入底物，酶系统的影响下，会引起一个可见的排放。这种类型的信号增强，使研究人员能够开发绑定容量检测，更快，更敏感，比任何传统的比色或放射性检测。
其他化学发光系统使用一个的非酶促直接化学发光标记。直接标签往往酶系统相比具有较低的背景信号，并且通常非常快速地产生一个信号。与吖啶酯系统的免疫学的结合和随后的洗涤步骤后，该信号需要开发只有2秒，比30分钟或更长的时间的酶生成的系统（参见图）。图。吖啶? 2 HNS酯（分子量632.55）可生物素化，并用于开发一种快速，灵敏的小分子生物素结合法。
在今天的实验室，用来检测化学发光光度计已经变得越来越普遍，化学发光链霉亲和素包被的磁性微球的定量分析结合实验的兴趣有所增加。增强化学发光法的优点在于，提供了超过比色酶，荧光或放射性测定的灵敏度。当开发一个特定的链霉亲和素包被的磁性颗粒的结合容量的测定，是特别有益的，化学发光的和放射性的检测是唯一的，可以读取的格式在无干扰的微球颗粒本身的存在。
这种新的方法来制定有约束力的容量检测携带劣势。与更常规的EIA，RIA，FIA的方法，良好的特点是能够被生物素化的化学发光酯的商业可用的不同是有限的。分别为这不是的情况下，本文由对照品网收集整理提供可以运行孵育微球的化学发光酯与直接结合容量的测定，用光度计测量所发出的一定浓度的微球的相对光单位（RLUs），然后转换到实际的绑定根据RLUs发出了由一个化学发光分子的数量。因为它是，化学发光酯可以被生物素化并纯化。然而，除非精确地知道在一个给定的样本中的浓度吖啶，有必要开发测定使用的间接格式。
有了这个障碍，这种的方法进行第一水浸微球与游离生物素，洗涤，加入生物素化吖啶（B-ACR）的浓度恒定，再洗（参见图4）。这就确保了，基于来自于化学计量数量的组的所有的链霉抗生物素蛋白上的结合位点被占用的游离生物素的链霉抗生物素蛋白结合，基体颗粒可用于滴定的。这是用来作为发光检测仪上的“空白”，是因为任何给定的信号关闭吖啶酯（疏水性的分子）的非特异性结合的疏水性微球的暴露的表面。优化在测定中使用的阻滞剂或更剧烈的洗涤步骤是必要的，以降低这个值接近零。图。增加化学发光信号，光度计读取结果时，较低浓度的游离生物素的存在下加入了一定量的生物素化的吖啶。
 然后，我们连续稀释游离生物素，并培养这与以前使用的B-ACR相同的恒定浓度，链霉亲和素包被的磁性微球。作为洗涤后的粒子的发光信号增加，这是处于打开状态的结合生物素化的吖啶免费网站的数目的指示。稀释液进行完成一个S形的结合曲线，表示更高的精确度变窄（参见图4）的曲线最陡的部分与稀释液。最后，因为很难确定一个直接点在曲线上，以评估最大结合，我们的理由是，用最陡的斜率的曲线上的点可以被认为是在当量点（带的链霉抗生物素蛋白生物素所占据的结合位点的一半，B-ACR的一半），并且这个值乘以2给出一个确切的结合容量值，B-ACR。本文由对照品网收集整理提供转载请注明来源：www.gjbzwz.com |
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